用于Maxwell16自动化纯化仪的DNAIQ参考样品试剂盒.PDF

Wizard® DNA Clean-Up System 这份说明书的英文原文可以从以下网址下载.请登陆以上网页查看 您是否使用的是最新版的说明书。如果您在使用这个系统时有任何问题，请与Promega 技 术支持联系。邮件：chinatech@ I. 描述1 II. 产品组分和储存条件 1 III. 采用真空多联器纯化DNA 的实验方案1 IV. 不采用真空多联器纯化DNA 的实验方案2 I. 描述 浓缩DNA样品，从反应中除去小核苷酸，从蛋白或盐中纯化DNA都需要有机抽提和沉淀，而这种方法会导 致得率低且不稳定。当纯化50-500ng 范围内的DNA 时对得率的担心会增加。 Wizard® DNA Clean-Up System 提供了简单有效的方法从下述物质中纯化线性和环状DNA （200-50,000bp ）： . 限制性内切酶，包括热稳定性限制性内切酶 . 磷酸酶和激酶 . DNA聚合酶，包括Taq DNA聚合酶 . 核酸外切酶和核酸内切酶，包括DNase I但不包括RNases . 单核苷酸 . 盐 整个过程可以在15分钟甚至更少的时间内完成，无需有机抽提或乙醇沉淀。DNA通过水或TE缓冲液从 Wizard® Clean-Up树脂上洗脱下来后，即可使用。 为了方便和有效，多个样品可以通过Vac-Man® (Cat.# A7231) 或 Vac-Man® Jr. (Cat.# A7660) Laboratory Vacuum Manifold一次处理。 II. 产品组分和储存条件 储存条件:储藏在室温(22 －25°C). 避免让树脂直接暴露于阳光的直射之下。 III. 采用真空多联器纯化DNA 的实验方案 多个样品通过Vac-Man® Laboratory Vacuum Manifold能很容易同时得到处理。Wizard® DNA Clean-Up 普洛麦格 （北京）生物技术有限公司．北京市东城区北三环东路 36 号．环球贸易中心 B 座 907 －909 ． 电话：010 传真：010 邮编 100013 4/06 CTB141 - 1 - System不能处理RNA样品，因为回收率不到50% 。 注意: 1. 取出部分树脂前一定要充分混匀Wizard® DNA Clean-Up Resin 。如果有结晶体或聚集体存在，将树脂置 于37 °C温浴10分钟。树脂本身是不溶的。使用前冷却到25-30°C 。 2. 1ml树脂大约能结合20µg DNA 。 需要用户提供的材料 . 80% 异丙醇 (2-丙醇, 试剂纯) . 预热 (65 －70°C) 的去离子水或TE buffer !样品体积必须在50-500ul之间，如果样品体积小于50ul，加无菌水补偿到至少50ul 。如果样品体积大于500ul， 将样品分开多份纯化。 1. 每个样品使用一个Wizard® Minicolumn 。 2. 将注射筒连接到每个Minicolumn 的Luer-Lok®部位上。将Minicolumn/注射筒的头部安装进真空多联器上。 !使用前混匀树脂 3. 加入1ml Wizard® DNA Clean-Up树脂到1.5ml离心管中。加入样品 (50-500µl) 到树脂中颠倒混匀数次。 4. 吸取树脂/DNA混合物加入注射筒。 提供真空使溶液通过Minicolumn抽出。停止为Minicolumn提供真空。 5. 在注射筒中加入2ml 80%异丙醇清洗柱子，再次提供真空使溶液通过Minicolumn抽出。 6. 待柱中溶液抽干后，继续抽真空30秒，不要超过30秒。移开注射筒，将Minicolumn转移到1.5ml离心管中。 最高速度(10,000 x g)离心2分钟以除去残留的异丙醇。 7. 将Minicolumn转移到新的离心管中。在Minicolumn 中加入50ul (见 Table 1)预热 (65 －70°C) 的水或TE buffer (10mM Tris-HCl [pH 7.6], 1mM EDTA)