第一章流式细胞应用.pdfVIP

第一章 流式細胞技術的發展與應用 十九世紀初開始，科學家們就不斷地在探索測量細胞的新技術， 1972 年史丹福大學的幾位 教授（LA Herzenberg 等）研製出螢光活化細胞分選儀的原型機，從此細胞測量技術進入一新紀 元。1973 年 Becton Dickinson 公司與史丹福大學合作，以 FACS 商標名推出了第一台流式細胞 分選儀 (Fluorescence-activated cell sorter, FACS) ，售予原研發機構史丹福大學遺傳系。隨著單 株抗體技術的發展，流式細胞儀檢測技術 (Flow Cytometer, FCM) 已經廣泛使用在基礎研究和臨 床實驗的各個方面，包括細胞生物學、腫瘤學、血液學、免疫學、藥理學、遺傳學及臨床檢驗 學等領域，對各個學科的發展發揮著重要作用。 1.1 流式細胞技術的臨床應用 1.1.1 在腫瘤學中的應用 這是 FCM 在臨床醫學中應用最早的一個領域。首先需要把實體瘤組織剪碎解聚、製備成單 細胞懸浮液，用螢光染料染色後對細胞的 DNA 含量進行 分析，將原本不易區分的群體細胞分成三個亞群 (G1 期，S 期和 G2 期) ，DNA 含量直接代表細胞的倍體狀 態，非倍體細胞與腫瘤惡性程度有關。DNA 分析在腫瘤 學中的應用有： 發現癌前病變，協助腫瘤早期診斷 人體正常組織發生癌變要經過一個由量變到質變的漫長過程，而癌前細胞即處於量變過程 中向癌細胞轉化階段。人體正常的體細胞均具有比較穩定的 DNA 二倍體含量。當人體發生癌 變或具有惡性潛能的癌前病變時，在其發生、發展過程中可伴隨細胞 DNA 含量的異常變化， FCM 可精確定量 DNA 含量的變化，作為診斷癌前病變發展至癌變中的一個有價值的標誌，能 評估癌前病變的性質及發展趨勢，有助於癌變的早期診斷。有文獻資料證實，癌前病變的癌變 發生率與細胞不典型增生程度有密切關系，增生程度越重，癌變發生率越高。隨著細胞不典型 增生程度的加重，DNA 非整倍體出現率增高，這是癌變的一個重要標誌。 BD Biosciences, COE - 1 – 在腫瘤的診斷、預後判斷和治療中的作用 各國病理學家多已認可 FCM 在腫瘤診斷中的重要作用性。DNA 非整倍體細胞峰的存在可 為腫瘤診斷提供有力的依據，FCM 分析病理細胞具有速度快、數據量大，敏感度高等優點，已 被用在臨床常規工作中。一般而言，腫瘤細胞 DNA 倍體分析對病人預後的判斷有重要作用， 異倍體腫瘤惡性病變的復發率高、轉移率高、死亡率也高，而二倍體及近二倍體腫瘤的預後則 較好。 FCM 不僅可對惡性腫瘤 DNA 含量進行分析，還可根據化療過程中腫瘤 DNA 分布直方圖的 變化去評估療效，了解細胞動力學變化，對腫瘤化療具有重要意義。臨床醫師可以根據細胞周 期各時相的分布情況，依據化療藥物對細胞動力學的干擾理論，設計最佳的治療方案，從 DNA 直方圖直接地看到腫瘤細胞的殺傷變化，及時選用有效的藥物，對腫瘤細胞達到最大的殺傷效 果。 此外 FCM 近幾年還被應用於細胞凋亡和多藥耐藥基因的研究中。醫學工作者開始研究如何 用藥物誘導癌細胞死亡。通過對細胞體積、光散射、DNA 含量及特異性抗原基因（如 bcl-2, Fas 等）測定分析出細胞凋亡情形。多藥耐藥性是腫瘤病人化療失敗的主要原因，FCM 對多藥耐藥 基因（P170 等）、凋亡抑制基因、及凋亡活化基因表達的測定，可為臨床治療效果分析提供有 力依據。 1.1.2 在臨床免疫中的作用 FCM 通過螢光抗原抗體檢測技術對細胞表面抗原分析，進行細胞分類和亞群分析。這一技 術對於人體細胞免疫功能的評估以及各種血液病及腫瘤的診斷和治療有重要作用。有大量文獻 資料介紹了淋巴細胞亞群等在各種疾病中的變化。正常人群淋巴細胞 T4 ：T8 比值大約為 2 ： 1 ，但在人體細胞免疫力低下時可出現比例倒置（1 ：2 ）。用 FCM 還可以監測腎移植後病人的 腎排斥反應，如果 T4/T8 比例倒置，病人預後良好，較少發生腎排斥現象；反之排異危險性增 加。同樣此種測定技術也用於愛滋病的診斷和治療中。目前 FCM 用的各種單株抗體試劑已經發 展到了百餘種，可以對各種血細胞和組織細胞的表型進行測定分析。 BD Biosciences, COE