影响凯氏定氮法测定粗蛋白准确性应注意的问题.docxVIP

影响凯氏定氮法测定粗蛋白准确性应注意的问题随着饲料行业的飞速发展，饲料原料及其饲料产品的价格也居高不下。而粗蛋白的检测是评定饲料原料及其产品的重要指标之一，目前常用的为凯氏定氮法（经常使用粗蛋白测定仪来测定饲料总粗蛋白的含量），即国家颁布的《饲料中粗蛋白的测定方法》(GB1996-6432)。但是该方法也存在着测定过程较复杂、费时等缺陷，测定时除严格按照规定程序操作外，还需要一定的实验技巧和实践经验。因此有很多饲料企业在实际操作过程中总是出现各种问题，导致检测结果异常而不知如何去分析。本文以GB/T6432-1994 为准，针对影响凯氏定氮对测定结果标准性应注意的细节问题和大家共同探讨。1 试剂的配制粗蛋白测定中所用的化学药品如浓硫酸、盐酸、氢氧化钠、硼酸、硫酸铜、硫酸钾( 硫酸钠)、硫酸铵、蔗糖等均为化学纯试剂，标定盐酸标准溶液用的无水碳酸钠为基准试剂。在配制试剂前一定要用p H 试纸或酸度计检测一下蒸馏水是否为中性，所用的烧杯、试剂瓶等配液设备清洗干净。1.1 盐酸标准溶液的配制配制的盐酸标准溶液尽量为低浓度，一般C(HCl)=0.02 ～ 0.05mol ? L-1。低浓度虽然用量大，但可减少操作误差和读数误差。配制盐酸标准溶液一定要严格按照标准操作进行，基准无水碳酸钠已定于270 ～ 300℃灼烧至恒重，称准至0.0001g，做4 ～ 6 个平行样，去掉最高值和最低值后取平均值，同时还要做空白试验。盐酸标准溶液的配制量尽量不要太多、使用时间太长，防止水分蒸发和盐酸挥发而影响其浓度的准确性。1.2 其他试剂的配制400g ? L-1 氢氧化钠溶液、20g ? L-1 硼酸溶液、混合指示剂(1g ?L -1 甲基红乙醇溶液与5g ? L -1 溴甲酚绿乙醇溶液等体积混合) 等主要是在称量时要做到快、准、稳，再就是防止使用时间太长，特别是混合指示剂不要超过3 个月。2 试样的选取和制备2.1 采样??? 饲料原料及产品的容积和质量往往很大，因此所采集的样品必须具有代表性，否则，即使一系列的分析工作非常精密、准确，其意义都不大，有时甚至会得出错误的结论，所以应采用正确的采样方法。采样应从具不同代表性的区域取几个样点，然后充分混合为整个饲料的代表样品，然后再从中分出一小部分作为分析样品。在采样过程中应做到随即、客观，避免受人为和主观因素的影响。还有一点应该注意，就是所采集的样品必须具有一定数量。其采集数量的多少应视饲料原料和产品水分含量、颗粒大小、均匀程度以及平行样的数量而酌情定夺。2.2 分样? 所采集的样品往往较多，而检测时所用试样往往较少，因此要对所采集的样品进行缩分。在多数饲料公司以及检测机构中一般采用方便简单的四分法。有条件的单位可采用分样器进行分样。2.3 粉样?? 饲料的样品一般为颗粒状，所以要对所分得的试样进行粉碎。粉碎所用的设备一般为咖啡磨或植物样本粉碎机，试样粉碎后一般过40 目筛，且一定要把粉碎后的试样及粉碎机中残留的部分清扫后充分混合均匀，避免粉碎的试样分级而影响分析结果的准确性。对于一些不易粉碎的粗饲料如秸秆渣等在粉碎机中会剩留极少难以通过筛孔，这部分一定不要丢掉，应尽力弄碎后一并均匀混入样品中，避免引起分析误差。2.4 称样试样的用量标准中规定为0.5 ～ 1g，为保证分析结果的准确性，在分析过程中应根据试样蛋白质含量的高低来决定所称试样的重量，如浓缩料、鱼粉、玉米蛋白粉、豆粕等高蛋白的试样可控制在0.5 ～ 1g之间，玉米、秸秆、苜蓿等低蛋白、粗饲料试样可适当增加到2 ～ 3g左右，以增加测定结果的准确性。还应注意一点，在称量时尽量用电子分析天平，准确到0.0001g 且无损地放入凯氏烧瓶或者消化管中。3 消化3.1 催化剂及其用量在环境污染小、价格便宜、催化效果好的前提下，目前催化剂多为硫酸铜和无水硫酸钾( 或无水硫酸钠)。其添加量不同公司差异较大，其中硫酸铜: 无水硫酸钾( 或无水硫酸钠) 主要有1∶9、1∶10、1∶15 和1∶17 等，国标为0.4g 硫酸铜和6g 无水硫酸钾( 或无水硫酸钠)，比例为1∶12。若添加量加大，消化液易结块不易转移；添加量减少，消化时间加长或者消化不完全。建议大家按国标执行为好。亦可根据自己的经验以及试样的多少、消化的难易程度、蛋白含量的多少自行调整。3.2 硫酸的用量浓硫酸的用量应视试样的重量、含水量及其所含蛋白高低而适当调整。对于体积大重量轻的粗饲料、高蛋白饲料或者含水量较高的试样、淀粉含量多的精料, 应适当加大浓硫酸的用量，多为15mL 左右。这是由于此类样品，浓硫酸在对其脱水和碳化是消耗量加大，当加入的浓硫酸量不足或者刚刚够试样脱水和碳化时就会出现烧干现象。反之则需加入10mL 左右。若通风柜的排风量较大时应适当多加浓硫酸2mL 左右，以防止浓硫酸的蒸发