细胞培养工程03细胞培养基.ppt

转铁蛋白（Transferin） 80 kDa 糖蛋白，N 和 C 端都有结合域与 Fe3+ 结合 转铁蛋白与受体结合之后被内吞并转移至溶酶体， Fe3+ 在酸性环境中被释放，转铁蛋白则迁移至胞外，循环利用； 胰岛素对许多细胞类型有调控葡萄糖吸收的作用； 转铁蛋白与异种受体结合能力比较弱； 基因重组人转铁蛋白上市 可被其它蛋白质取代如血红蛋白 可被铁络合物取代（如柠檬酸铁），但需要较高浓度 无血清培养基主要添加物 细胞培养工程 南开大学药学院 * toxic 血清白蛋白 血清中最丰富的蛋白质 难溶物的载体：游离脂肪酸 结合有害混合物：胆红素、重金属离子 0.1-5 mg/ml 基因工程人血清白蛋白上市 无血清培养基主要添加物 细胞培养工程 南开大学药学院 * toxic 蛋白水解物 动物或植物组织水解物或提取物曾经用于细胞培养，以减少对血清的依赖； 动物来源水解物或提取物现已剔除，取而代之的是大豆、稻米、小麦的酶或酸水解物； 含有氨基酸、短肽、无机盐、碳水化合物和维生素； 功能： 以短肽形式提供氨基酸，以较小渗透压代价富化培养基 某些短肽可能起到细胞因子的模拟混合物，与受体结合，起到促进细胞生长、延缓细胞凋亡的作用 无血清培养基主要添加物 细胞培养工程 南开大学药学院 * 细胞培养工程 南开大学药学院 * 实验技术 1 培养基过滤 醋酸纤维素膜 结构非对称性 亲水性 干燥：空气通过 湿润：空气排斥 过滤前后完整性测试 细胞培养工程 南开大学药学院 * 实验技术 1 培养基过滤 滤器准备 细胞培养工程 南开大学药学院 * 实验技术 1 培养基过滤 培养基过滤 细胞培养工程 南开大学药学院 * 实验技术 1 培养基过滤 过滤后滤器完整性测试 /china-mainland/zh/life-science/cell-culture/learning-center/cell-culture-manual.html 南开大学药学院 细胞培养基 细胞培养工程 南开大学药学院 * 培养基为细胞提供营养成分和关键生物活性物质，支持细胞生长、代谢以及生物学功能活性 主要营养成分 C 源：Glucose，Glutamine N 源：游离氨基酸，蛋白质水解物 脂类：必需与非必需脂肪酸，胆固醇 维生素：水溶性，非水溶性 矿物质（包括微量元素） 关键生物活性物质 细胞贴壁因子，促有丝分裂因子（参照血清成分） 在强化营养的同时，蛋白质水解物具有促有丝分裂作用 物理条件 pH，渗透压，溶解氧（Dissolved oxygen） 细胞培养基 * 细胞培养工业过程的两个阶段 细胞扩增（与化学过程催化剂角色相似） 产物形成（蛋白质表达）或细胞分化（细胞治疗） 不同阶段分别优化 细胞培养过程优化 充分了解细胞的生理需要和代谢特点 生长培养基与生产培养基分别优化 结合生物反应器操作，操纵细胞生长与代谢行为，使过程效益（或效率）最大化 细胞生长环境优化 细胞培养工程 南开大学药学院 在体内，细胞与血液不直接接触，物质交换依赖于庞大的毛细血管网络与细胞间质中的扩散过程 胞间质浓度（mM） 胞内浓度 （mM） Na+ 140 14 K+ 4.0 140 Ca2+ 1.2 0.01 Mg2+ 0.7 20 Cl- 108 4 HCO3- 28.3 10 HxPO4y- 2 11 SO42- 0.5 1 Amino acids 2 8 Lactate 1.2 1.5 Glucose 56 Protein 2 4 Total Chemicals (mM) 301.8 302.2 Corrected Osmolarity (mM) 281.3 281.3 体内细胞间质的化学环境 Source: Cell Culture Bioprocess Eng. pp100 细胞培养工程 南开大学药学院 * 生物体液 血清 血浆 胚胎提出物 淋巴液 蛋白质水解物 天然培养基 细胞培养工程 南开大学药学院 * 现代培养基类型 细胞培养工程 南开大学药学院 基底培养基（Basal Media） 糖 氨基酸 脂肪酸，脂类前体 维生素，核苷类 普通盐类，微量元素 pH 缓冲体系 添加物（Supplements） 血清 生长因子/载体蛋白质 蛋白质水解物 （含）血清培养基 无血清培养基 （Serum-free media） * 培养基比较 细胞培养工程 南开大学药学院 复合（血清）培养基 （Complex media） 血清含量可占到 20%