RNA干扰CXCR7基因对人肝癌MHCC97H细胞生物学特性的影响.pdfVIP

第 1O期 化 学 世 界 ·597 · RNA干扰 CXCR7基因对人肝癌 MHCC97H细胞生物学特性的影响 林 灵 。 韩梅梅 ， 王 芳 ， 申华莉 。 余红秀 ¨， 杨艽原 。· (1．生物 医学研究院，复旦大学 上海 医学院，上海 200032；2．复旦大学 化学系 ，上海 200433； 3．复旦大学 生命科学研究院，上海 200433) 摘 要 ：通过构建针对CXCR7的短发夹状 RNA(shorthairpinRNA，shRNA)干扰表达质粒，转染 人肝癌细胞系MHCC97H，嘌呤霉素筛选建立低表达 CXCR7基 因的稳转株 ，分别采用 qRT—PCR 和 WesternBlot检测 shRNA靶 向沉默效果 。通过 CCK一8增殖实验与流式细胞术研 究CXCR7抑 制对细胞增殖及凋亡的影响；通过划痕愈合 实验研 究CXCR7抑制对 MHCC97H 细胞迁移能力的 影响。结果表 明：成功构建了慢病毒表达载体pLKO．1一CXCR7shRNA，显著下调 MHCC97H细胞 中CXCR7utRNA及蛋 白的表达。增殖实验显示，与阴性对照组相 比，干扰表达组细胞生长速度受 到明显抑制 (声O．001)；干扰 CXCR7表达可诱导细胞凋亡，尤以早期凋亡率上调为著 ；划痕实验 显示抑制 CXCR7表达延长细胞的伤痕愈合时间。 关键词：肝细胞肝癌；CXCR7；增殖能力；细胞凋亡；细胞迁移 中图分类号：R735．7 文献标志码 ：A 文章编号 i0367—6358(2013)10—0597—04 EffectsofDown—regulatingCXCR7GeneExpressiononBiological CharacteristicsofHumanHepat0ce1lu1arCarcinomaCellLineMHCC97H LIN Ling ， HAN Mei—mei， W ANG Fang ， SHEN Hua—li ， YU Hong—xiu ：¨ ． YANG Peng—yuan · (1．InstitutesofBiomedicalSciencesofShanghaiMedicalSchool，FudanUniversity，Shanghai200032； 2．DepartmentofChemistry，FudanUniversity，Shanghai200433； 3．SchoolofLi Sciences，FudanUniversity，Shanghai200433，China) Abstract：LentiviralexpressingvectorsofsmallhairpinRNA aimedatCXCR7genewereconstructedand transfectedintoMHCC97H cellline．Celllineswhich stablyexpressed 1OW leve1ofCXCR7wereestab— lishedbypuromycinscreening．ThemRNA andproteinexpressionofCXCR7weremeasuredbyRT—PCR andwesternblotanalysis，respectively．Theeffectsofdown—regulationofCXCR7oncellproliferation，ap— optosisandmigration ofM HCC97H celllinewereevaluatedbyCCK一8assay，flow cytometry assay and woundscratchassay，respectively．Theresultsshowedthatlentiviralexpressingvectorswereconstructed successfullyandstablytransfectedintoMHCC97H cellswhichc