液相色谱-质谱联用法测定动物血浆中^15N标记氨基酸的同位素丰度.pdfVIP

第 8期 化 学 世 界 ·475 · 液相色谱一质谱联用法测定动物血浆 中 N标记氨基酸的同位素丰度 侯 捷 ， 雷 雯 ， 杜晓宁 (1．上海化工研究院 上海稳定性 同位素T程技术研究 中心 ，上海 200062 2．华东理工大学 化学与分子工程学院 ，上海 200237) 摘 要 ：建立了液相色谱一质谱联用(LC—MS)测定血浆 中稳定 同位素 N标记 的甘氨酸、谷氨酸、天 冬氨酸和尿素同位素丰度的方法。待测动物血浆样品经丙酮提取 ，氮吹浓缩后 ，用液相 色谱 电喷雾 质谱 (LC—ESI—MS)进行检测 。以 乙腈和质量分数为0．2 甲酸水溶液为流动相进行 洗脱 ，经亲水 色谱柱分离，在选择 离子模式 (SIM)下监测特定质荷 比的上述四种待测物，依据测得的峰 强度计算 每种待测物的同位素丰度 。通过对 已知同位素丰度的甘氨酸一N 、谷氨酸一N、天冬氨酸一N和尿 素一N。进行验证 ，相对偏差在0．7％以内。方法具有样品前处理简单、检测耗时少、表征结果准确， 一 次进样可同时测定血浆 中稳 定同位素标记甘氨 酸一N、谷氨酸一N、天冬氨 酸一N 和尿素 N 的同位素丰度等优点。 关键词 ：N一氨基酸；同位素丰度 ；液相色谱一质谱联用 中图分类号 ：0657．63；TQ126．2 文献标志码 ：A 文章编号 ：0367～6358(2016)08—0475—06 IsotopeAbundanceCharacterizationof N—LabeledAminoAcidsin AnimalPlasmabyLiquidChromatography—M assSpectrometry HOU Jie 。 LEIWen～， DU Xiao—ning (1．InstituteoJShanghaiChemical，EngineeringandTechnologyResearchCenterofStableIsotope，Shanghai200062，China； — 2．EastChinaUniversityofScienceandTechnology，CollegeofChemistryandMolecularEngineering，Shanghai200237，China) Abstract：A liquidchromatography—massspectrometry(LC—MS)methodwasdevelopedforthedetermina～ tionofisotopicabundanceofglutamicacid一 N，glycine一。N ，asparticacid一 N andurea一 N2．Theblood samplewasextractedwithacetonetogettheproteins．ThecompoundwasseparatedonCosmosilH iliccol～ umnwith acetonitrileand0．2 formicacidaqueoussolution asmobilephase．Thedetection ofglutamic acid一 N ，glyeine一 N ，asparticacid一 N andurea一 N2wascarriedoutbyLC—MSwithelectrosprayioniza— tionunderselectedionmonitoringmode．Theknownisotopicabundanceof glutamicacid一“N 。glycine一 N，asparticacid N andurea一 N2wascheckedbythedevelopedmethod．Therelativedeviation between