普鲁卡因LD50的测定和计算.pdf

实验七 普鲁卡因半数致死量（LD50 ）的测定和计算 【实验目的】 1．了解药物半数致死量（LD50 ）测定的原理和意义。 2 ．通过实验掌握药物LD50 的测定方法、步骤和计算过程。 【实验原理】 半数致死量（LD50 ）是指药物能使半数动物死亡的剂量。它是以动物死活与否为指标，此种 效应与剂量间关系属于质反应的量效关系。将动物均匀分组，各组动物给予不同的剂量，观察各 组动物死亡的百分率。在一定的剂量范围内，各组的死亡率随剂量的增加而递增。将结果绘图， 可见剂量与反应的关系为一不对称的长尾 S 形曲线（图 4-11 A ）。如把剂量转换成对数剂量，则成 对称的 S 形曲线（图 4-11 B ）。从对称的 S 形曲线上可以看到它的中段斜率较大，在 50%死亡率的 部分斜率最大，越靠近曲线的两端斜率越小，这表示在曲线中段处，剂量稍有变动，死亡率就有 明显的差别；相反，在曲线的两端处，剂量变动对死亡率的影响不明显。在 50%死亡率处，最能 代表大多数动物的状况，最具有代表性，反应比较灵敏，测定也最准确。故用 50%死亡率所对应 的剂量（LD50 ）来反应药物的毒性。LD50 越大，药物毒性越小。LD50 越小，药物毒性越大。将纵 坐标死亡率转换成机率单位，横坐标仍用对数剂量，量－效曲线可模拟出一条直线（图 4-11 C ）， 便于进行准确的 LD50 计算。LD50 是衡量药物毒性大小的主要指标，LD50 与 ED50 （半数有效量） 的比值称为药物的治疗指数，此比值越大表示药物越安全。 图4-11 死亡率、剂量与机率单位的关系 A ．死亡率与剂量的关系 B ．死亡率对数剂量的关系 C ．机率单位与对数剂量的关系 LD50 的测定方法很多，例如目测机率单位法、加权机率单位法（Bliss 氏法）、寇氏法（Karber 氏法）及序贯法等。基本程序是将动物分成若干组，每组给予不同剂量使其产生不同的死亡率， 再用统计方法求算 LD50 。其中Bliss 氏法最为常用，申报新药常采用此方法。 【实验对象】 小白鼠，体重 18～22g ，雌雄各半，实验前禁食 12 小时，不禁水。 【实验药品】 2%盐酸普鲁卡因溶液 66 【实验器材】 鼠笼、天平、1ml 注射器、电子计算器（带函数）。 【实验方法和步骤】 1．探索剂量范围：取小白鼠 8～10 只，以 2 只为一组（雌雄各半），分4～5 组，选择剂量间 距较大的一系列剂量，分别给各组腹腔注射盐酸普鲁卡因溶液，观察出现的症状并记录死亡数， 找出引起 0%及 100%死亡率剂量的所在范围（致死量约在 105～150mg/kg 范围内）。本步骤可由实 验室预先进行。 2 ．正式实验：在预实验所获得的0%和 100%致死量的范围内，选用几个剂量（一般用 5 个剂 量，按等比级数增减，相邻剂量之间比例为 1:0.7 或 1:0.8），各剂量组动物数为 10 只（雌雄各半）， 分别标记。动物的体重和性别要分层随机分配，完成动物分组和剂量计算后按组腹腔注射给药。 最好先从中剂量组开始，以便能从最初的几组动物接受药物后的反应来判断两组的剂量是否合适， 否则可随时进行调整，尽可能使动物的死亡率在 50%上下，死亡率为 0%或 100%时，不能用于计 算。 实验以全班为一个单位，可以一个组观察一个剂量组（10 只小白鼠），或每组各做每一剂量组 的 2 只小白鼠。务求用药量准确，注射方法规范，以减少操作误差，避免非药物所致的死亡，得 到较理想的结果。 3 ．观察试验结果：给药后即观察小白鼠活动改变情况和死亡数，存活者一般都在 15～20min 内恢复常态，故观察30min 内的死亡率。 4 ．计算LD50 及其 95%可信限： LD50 计算方法有多种，这里介绍最常用的加权机率单位法（Bliss 法）。此法虽计算步骤稍繁， 但结果较准确，实际应用时可借助于计算器。 首先，用较大的剂量间距确定致死剂量的范围，进而在此范围内设定若干剂量组，剂量按等 比方式设计，相邻两个剂量间距比例在 0.65～0.85 之间，给药后观察 7～14 天内动物一般情况和 死亡数，根据死亡率计算 LD50