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同种异体脂肪干细胞组织工程骨修复管状骨缺损 摘 要 目的 脂肪干细胞（Adipose-Derived Stem Cell, ADSCs）因具有良好的成骨 分化潜能而常被用来做为骨组织工程的种子细胞。本实验在脂肪干细胞提取、培 养及成骨诱导分化所做工作的基础上，建立兔尺骨缺损模型，进一步探讨同种异 体脂肪干细胞组织工程骨修复管状骨缺损的可行性。 方法 （1）获取新西兰大白兔的肩胛部脂肪，分离培养具有多向分化潜能的 脂肪干细胞；（2 ）以成骨诱导液培养的第3 代细胞（P ）为实验组，LG-DMEM 3 作为对照组。DNA 定量法测定细胞的增殖曲线、定性检测碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase, ALP ）及细胞外钙盐沉积情况；（3 ）P3 兔ADSCs 与脱钙骨材料复合 后，体外成骨诱导培养（LG-DMEM 设为对照）。用扫描电镜对细胞-材料复合物 的表面进行观察、DIO 标记细胞后采用激光共聚焦显微镜观察细胞生长情况、定 量检测碱性磷酸酶及细胞外钙离子；（4 ）制造兔两侧尺骨临界大小（15mm 长度） 的缺损，分别植入兔ADSCs-脱钙骨复合物体 （实验组）和单纯脱钙骨材料（对 照组）；（5 ）12 周后取样本，行三维CT 和组织学检测，观察成骨情况。 结果 兔ADSCs 体外增殖能力强，且具有多向分化潜能；与脱钙骨材料具有 良好的细胞相容性；细胞材料复合物植入 12 周后，三维CT 显示实验组有新生 骨基质长成，对照组未见骨组织生成。组织学检测显示实验组缺损处被典型的骨 组织取代，可见新生骨小梁附着于脱钙骨表面，而对照组中只有少量的骨组织和 纤维组织充填。 结论 通过正确的途径可以证实兔 ADSCs 能在脱钙骨支架材料上很好的粘 附和生长，兔ADSCs-脱钙骨材料复合物植入体内能成功修复临界大小的管状骨 缺损。 关键字 骨组织工程 脂肪干细胞 脱钙骨 成骨分化 骨缺损 2 Repair of tubular bones defects with allogeneic adipose derived stem cells and demineralized bone matrix scaffold in a rabbit model Abstract Objective Adipose derived stem cells (ADSCs) with osteogenic differentiation potential have been documented as an alternative cell source for bone regeneration. In this study, we establish a rabbit ulnar defect model basis on the work of adipose derived stem cells extraction, culture and osteogenically induced, to further investigate the feasibility of allogeneic ADSCs in tissue engineered bone repair of tubular bone defects. Methods (1)Scapular fat was isolated from New Zealand white rabbits, and further cultured in vitro (rADSCs). (2)Passage 3 rADSCs cultured with osteogenic medium were set as exper