中图版生物选修1课外阅《读：PCR技术的诞生》(素材)教案.docVIP

6.3 PCR技术的诞生 [PCR仪器] 　　pcr仪器的发展 　　pcr温度循环至关重要，pcr扩增仪各参数必须准确。自perkin –elmercetus公司第一台pcr扩增仪问世以来，现已有几十家不同的厂家在国内外生产和销售pcr扩增仪。在短短的几年间，扩增仪经过几代的发展，不断采用新技术，并且进一步朝方便、实用、高智能化和自动化的方向发展。 　　为了便于了解和选购适宜的pcr实验设备，现将部分国内外pcr扩增仪列表如下；这些仪器主要用变温铝块、变温水浴及变温气流的方式达到热循环的目的，各有其优缺点。国产1109型dna扩增仪则是用恒温浴机械手移位式。更接近于手工操作。ptc-51a/b体积小，智能化与自动化程序高，可以兼做套式pcr，方便实用。以上各种仪器一般都配有微电脑自动控制温度、时间及循环数，可以达到节省劳动力的目的。在采用这些仪器作pcr试验之前，一般均应实测管内温度变化循环情况，以了解升、降温时管内因热传导造成的温度滞后情况和实际到达的最高、最低温度，用于修正设计的循环参数。温度滞后受到所用eppendorf管材料、壁厚及形状（与铝块孔匹配程度）的影响，这对变温铝块式仪器影响更大些。对于配用制冷机式半导体元件致冷的仪器，在使用低于室温的温度来保冷pcr反应后小管时，应注意冷凝水的问题，勿使流入仪器内浸湿半导体元件而损坏仪器。 　　国内外生产的几种dna扩增仪 　　1109型 　　北京新技术所与军科院联合 　　机械臂 　　变温水浴 　　电子调温 　　40×0.5ml 　　16400元/台 　　90a/b型 　　中科院遗传所 　　机械臂 　　变温水浴 　　电热 　　14000元/台 　　ptc-51a/b型 　　军事医学科学院 　　变温气流 　　电子调兼作套式 　　30×0.5ml 　　12000元/台 　　dna thermal cycler 　　perkin –elmercetus(美) 　　变温铝块 　　压缩机致冷 　　48×0.5ml 　　us $ 20000.- 　　thermocycler 　　＃60 　　＃00 　　＃180 　　b..braun 　　biotech 　　(德) 　　变温水浴98四档 　　电热,自来水冷却 　　60×1.5ml 　　100×1.5ml 　　180×1.5ml 　　dm 30000.- 　　automatic temperature cy-cler single block twin block 　　ericomp inc.(美) 　　变温铝块25～100 　　电热,自来水冷却 　　29×1.5ml 　　58×1.5ml 　　us $4985.- 　　us $7980.- 　　grant autogen 　　grant instrumant ltd(美) 　　变温水浴0～99 　　电热,自来水冷却或加冷循环器 　　50×1.5ml 　　or 　　50×1.5ml 　　us $250. –plus 　　us $ 15.-for 　　rack(x2) 　　techne phc-1 　　phc-2 　　techne ltd.(英) 　　变温铝块0～99三档 　　电热500w水冷100w 　　54×0.5ml 　　54×0.5ml 　　24×1.5ml 　　￡3383. – 　　￡3997. - 　　biooven 　　biothrm corp(美) 　　变温气流 　　-150 　　115v 11a 　　200’s of 4×96plate 　　us $ 2990. - 　　trio-thermo-block tb-1 　　biomertra(德) 半导体变温 　　220v 　　3×20管 　　分别控温 　　dm12900. - 　　micro cycler e 　　eppendorf(美) 变温铝块 　　220v/100v 　　3×29管 　　us $ 3500. - 　　［PCR常见问题］ 　　PCR产物的电泳检测时间 　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚至消失。 　　假阴性，不出现扩增条带 　　PCR反应的关键环节有模板核酸的制备，引物的质量与特异性，酶的质量及， PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 　　模板：模板中含有杂蛋白质，模板中含有Taq酶抑制剂，模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。模板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应 固定不宜随意更改。 　　酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而 导致假阴性。需注意的是有时