EGFP在大肠杆菌E.coli中的表达与检测.pptx

EGFP在E.coli中的表达与检测 3组;一;;;;;;;;;;;;pEGFP-N3质粒是一个用于在哺乳动物细胞系中表达EGFP融合蛋白的质粒，它编码GFPmut1突变体，发生了两个氨基酸的替换。;;;;;;;;原核表达载体通常为质粒，典型的表达载体应具有以下几种元件：;;;;;;;第几点;;;(含pEGFP-N3和pET-28a的大肠杆菌DH5α) （1）固-液接种：从LB平板上挑取含有以上质粒的E.coli DH5α单菌落，接种于5mL LB培养基中，37 ℃振荡培养过夜。 （2）液-液转接：以1%接种量将过夜培养的E.coli DH5α接种于新鲜LB培养基中，37℃，220 rpm振荡培养2～2.5h。;（1）取1.0～5.0 mL的菌液，室温下13000 rpm离心1 min收集细菌。 （2）倒弃培养基，加入250 μL SolutionⅠ/RNase A混合液，涡旋振荡使细胞完全悬浮。 （3）往重悬混合液中加入250 μL Solution Ⅱ，轻轻颠倒混匀4～6次，此操作避免剧烈混匀裂解液且裂解反应不超过5 min。 （4）加入250 μL Solution Ⅲ，温和颠倒数次至形成白色絮状沉淀。 （5）室温下，13000 rpm离心10 min。 （6）转移上清液至套有2 mL收集管的HiBind DNA结合柱中，室温下，1