基因克隆的酶学基础lyw20111014.pptVIP

1. 来源： （1）限制（Restriction） ② 不完全同裂酶 DNA 连接酶 二、DNA ligase的特点 2. 连接条件 4.热稳定DNA连接酶 DNA片段 第三节 DNA聚合酶 二、常用的DNA聚合酶的特点 3. 常用DNA聚合酶的特性比较 第四节 DNA修饰酶 4. 末端转移酶的用途 （2）再生酶切位点 二、碱性磷酸酶 2. 碱性磷酸酶的特性 常用的有噬菌体SP6、T7、 T3 RNA聚合酶，其中SP6 RNA聚合 酶来源于SP6噬菌体感染的鼠伤寒沙 门菌(Salmonella typhimurium)， T7、T3RNA聚合酶源自大肠杆菌， 目前这些RNA聚合酶已能用基因工程 的方法大量制备。 SP6、T7、T3 RNA聚合酶可以分别识别 双链DNA模板上相应的噬菌体特异性启动子， 以ATP、GTP，CTP和UTP为原料，沿此双链 DNA模板起始RNA的合成． SP6、T7、T3RNA聚合酶可用于合成单链 RNA以作为杂交用探针、体外翻译系统中的功 能性mRNA，体外剪接反应的底物；也可以直 接用于原核或真核细胞中克隆基因的表达。 某研究人员发现一种羽毛颜色较为奇特的鸟类，经前期研究发现这个改变可能与其中的一个控制色素生成的基因a有关，为了弄清基因a的突变与其表达的蛋白功能的变化，需要将此基因克隆并表达出