基因工程7外源基因的表达.pptVIP

第六章 外源基因的表达 第一节 外源基因表达的机制 外源基因的起始转录 mRNA的延伸与稳定 外源基因mRNA的有效翻译 表达蛋白在细胞中的稳定性 4.1 Lac和Tac表达系统 4.2 PL和PR表达系统 4.3 T7表达系统 5. 形成包涵体的原因 基因工程菌的表达产率过高 重组蛋白的氨基酸组成 重组蛋白所处的温度与pH值 重组蛋白是大肠杆菌的异源蛋白 6.包涵体纯化 7. 包涵体复性方法 稀释复性 透析复性 超滤复性 柱上复性 2.融合表达的亲和纯化蛋白标签 个子越小越好 生理条件下带电越少越好 容易得到和天然蛋白相似的产物 融合标签的免疫原性越少越好 融合产物不必除去标签可直接作为抗原免疫 2.1 His蛋白标签 2.2 His蛋白标签类型 N末端加入标签 C末端加入标签 顺式抑制载体 多系统表达载体 含有双标签载体 2.3 GST融合表达系统 2.4 pGEX表达融合蛋白的优越性 载体构建无需考虑SD及RBS序列 由于载体自带LacI基因，对宿主无选择性 蛋白纯化条件温和，有利于保持蛋白活性 GST蛋白与目的蛋白分离简便 2008年度诺贝尔化学奖 5、聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE β-半乳糖苷酶 ；乳酸菌；沙克乳杆菌细菌素 Figure 1