小鼠大脑皮层树突棘双光子活体成像.pdfVIP

小鼠大脑皮层树突棘双光子活体成像 基本原理 大脑通过神经回路传递并整合信息从而实现复杂的功能。以往对神经回路的 理解主要基于对离体固定脑组织、活脑片或是培养神经元的研究。然而，由于大 脑结构与功能的极端复杂性，离体研究很难充分、深入地揭示实际活体大脑高级 功能活动的机制，比如学习记忆和神经疾病发生发展的机理。因此，要深入揭示 脑神经回路的结构和功能，需要对活体脑组织进行长时程的反复观察和研究。 荧光蛋白转基因动物的出现与双光子显微成像技术（two-photon microscopy，TPM ）的发展以及活体颅窗技术的成熟使活体反复观察神经回路 成为可能。首先，在Thy-1 启动子荧光蛋白转基因小鼠大脑皮层中，部分第五 层锥体神经元高水平表达绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP） 或黄色荧光蛋白（yellow fluorescent protein，YFP ），使这些神经元及其神 1 经纤维乃至纤维上的突起可被激发产生荧光 ；另外，双光子显微成像技术以两 个能量较低、长波长的红外（近红外）光子激发同一个荧光分子，显著降低生物 样本对激发光的吸收和散射，增加了光穿透深度，并降低了荧光漂白和光损伤程 度，实现了对活体厚组