常规微生物试验技术(2010高级研修班).pptVIP

* ? 2004 Microsoft Corporation. All rights reserved. This presentation is for informational purposes only. Microsoft makes no warranties, express or implied, in this summary. * * ? 2004 Microsoft Corporation. All rights reserved. This presentation is for informational purposes only. Microsoft makes no warranties, express or implied, in this summary. * （一）菌落形态的描述 不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般具有稳定的特征，可以成为对微生物进行分类、鉴定的重要依据。根据菌落的形态大小、隆起形状、边缘形状等特征可对不同菌落进行描述并加以区分。 微生物菌落特征 （二）革兰氏染色 革兰氏染色法是最常用的鉴别染色法之一，可将细菌区分为革兰氏阳性、革兰氏阴性两大类。染色后细菌能保留结晶紫而呈蓝紫色者，为革兰氏阳性菌(可写作G+)，细菌被酒精脱出紫色染料而被复红或沙黄染成红色者，为革兰氏阴性(可写作G-)。分类学上属于同一科的细菌革兰氏染色反应相同，如芽孢杆菌科细菌全是革兰氏阳性；肠杆菌科细菌全是革兰氏阴性。 1. 原理 革兰氏染色法基本原理是：细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此， 呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。 2. 操作步骤 （1）涂片 挑取培养16－24小时的幼龄待检菌涂片，自然干燥后通过酒精灯火焰1－2次固定，不可过热，以载玻片不烫手为宜。 （2）初染 加草酸铵结晶紫染液一滴，约一分钟，水洗。 （3）媒染 滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。 （4）脱色 将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95%酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20－30秒钟，立即用水冲净酒精。 （5）复染 用番红染液染1－2分钟，水洗。 （6）镜检 干燥后，置油镜观察。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈蓝紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。 （a）初染 （b）媒染 （c）脱色 （d）复染 3. 注意事项 革兰氏染色的结果与培养基成分、培养条件及操作技术等有着密切关系。如涂片太厚或酒精脱色时间太短，革兰氏阴性菌则可染成革兰氏阳性菌。酒精脱色时间若太长，革兰氏阳性菌又会染成革兰氏阴性菌。在缺乏镁盐的培养基中，革兰氏阳性菌可变为革兰氏阴性菌。菌龄也能影响染色的结果，这和生长过程中核酸含量的改变有关，例如本是革兰氏阳性菌的老龄菌因核酸的减少则常出现许多革兰氏阴性菌的细胞。 对未知菌进行革兰氏染色时，应用已知的革兰氏阴、阳性菌作阴、阳性对照，以确证染色操作正确，结果可靠。 三、细菌鉴定中常用的生理生化反应 （一）酶类试验 1. 氧化酶试验 氧化酶即细胞色素氧化酶，也称呼吸酶。氧化酶在有分子氧和细胞色素C存在时，可氧化盐酸二甲基对苯撑二胺或盐酸四甲基对苯撑二胺，使之呈玫瑰红到深紫红色。 氧化酶试验 （左为阳性，右为阴性） 2. 触酶（过氧化氢酶）试验 具有触酶（过氧化氢酶）的细菌能催化过氧化氢，放出新生态氧，继而形成分子氧，出现气泡。 注意事项：（1）测试菌要新鲜；（2）过氧化氢酶是1种以正铁血红素作为辅基的酶，所以测试菌所生长的培养基不可含有血红素或红血球，因在这种培养基上生长的菌，易产生假阳性。 左侧为阳性（产生气泡），右侧为阴性对照 3. 硝酸盐还原试验 某些细菌能把培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨和氮等，在细菌分类鉴定中常常检查这一特性。当培养液中加入格里斯氏（Griess）试剂时，如果培养基