异甘草素对肾缺血再灌注.pptVIP

异甘草素对肾缺血再灌注的保护作用 目的与意义 本实验通过复制肾缺血再灌注模型，利用尾静脉注射异甘草素的方法，对肾缺血再灌注损伤进行干预，探讨其对肾缺血再灌注损伤的保护作用。其目的在于探讨异甘草素能否在肾缺血再灌注的保护中作为一种较为理想的药物，为临床提供重要的理论支持。 缺血再灌注损伤主要与能量代谢障碍、大量活性氧自由基的生成、细胞内钙超载、细胞内的炎症反应、核转录因子、内皮素等多种因素[1]有关。 临床上的防治方法主要是： 1、尽早恢复血流量，缩短缺血时间； 2、采用低压、低温、低钙再灌注； 3、清除活性氧和抗氧化； 4、钙拮抗剂的使用； 5、抗白细胞疗法； 6、补充能量及促进能量生成； 7、启动细胞内源性保护机制。 异甘草素 异甘草素（iso liqu irit-igenin,ISL）是从中药材甘草中提取的一种异黄酮类化合物，它的生物活性较强，具有抗肿瘤、抗艾滋病、抗糖尿病并发症等活性[3], 由此成为药学界的研究热点之一。 目前市场上已有异甘草素使用，在抗肿瘤和抑制艾滋病方面具有良好的疗效。而对脑缺血再灌注有保护作用只局限在实验室证明，但是对肾的缺血再灌注的保护作用及其机制尚未见报道。 异甘草素可以抑制致癌剂的致癌作用[4]。 Lee CK[5]等研究异甘草素不仅能显著抑制肿瘤细胞的生长，还能对抗化疗时血清中肌酐及血中尿素氮增加的肾毒性和血清中谷丙转氨酶、天冬氨酸转氨酶升高的肝脏毒性，有效保护了肝和肾。它能预防和抑制肿瘤细胞增殖，可能是其能阻止细胞周期和诱导细胞凋亡而发挥作用。其中它能抑制内皮细胞中TNF-ɑ诱导ROS的产生及NF-kappa B的转录与活化。抑制脂质过氧化反应水平[6]。异甘草素在对抗机体的生理氧化过程中发挥作用而具有抗氧化作用[7]。同时有相关研究指出异甘草素对卡介苗加脂多糖诱导的小鼠免疫性肝损伤具有明显保护作用，能剂量依赖性降低血清中ALT、AST水平和肝组织中TNF-ɑ,IL-1β水平，减轻肝组织坏死范围及程度，减少炎症细胞浸润[8]。而刘斌等[9]研究表明异甘草素可能通过非竞争性钙拮抗作用松弛豚鼠气管平滑肌。除此以外，异甘草素具有解痉作用，是有效的肌松药，能抗心律失常和抗溃疡作用。因为异甘草素的酚羟基基团具有具有抗生物氧化过程而达到抗氧化、清除氧自由基作用以抑制细胞或者组织在损伤过程中脂质过氧化或氧自由基产生过多进一步加重损伤[10]。而相关研究发现ISL在心、脑缺血再灌注损伤动物模型中具有抗脂质过氧化和抑制血小板聚集等作用[11], 因而可对脑缺血再灌注损伤的脑细胞起到修复和保护作用[12]。但ISL对肾缺血再灌注损伤的保护作用及其机制尚未见报道。 仪器设备情况：本实验采用机能实验室常用设备，具体如下：哺乳动物手术器械一套、注射器数支、小烧杯、试管、离心管数只、移液器、吸头若干、离心机、电子天平、组织匀浆机、722分光光度计、肌酐测定试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）测试盒 实验动物情况:健康大鼠5只 药品试剂来源：本实验采用异甘草素注射液、生理盐水、3%戊巴比妥钠 大鼠（5只） 给药组 （1.2号） 模型组 （3.4号） 假手术组 （5号） 尾静脉注射异甘草素 尾静脉注射生理盐水 不作处理 夹闭双侧肾动脉30min 松开动脉夹，再灌注60min 观察大鼠肾脏外观与颜色，测定血清肌酐浓度（μmol/L）和肾脏局部组织中SOD含量(NU/ml) 1、2大鼠：在尾静脉注射异甘草素7mg/kg 3、4大鼠：在尾静脉注射等量的生理盐水 5号大鼠： 不作处理。 大鼠术前12h禁食，自由饮用水。分别经腹腔注入3%戊巴比妥钠1ml/kg进行麻醉，仰卧固定在手术台上。 仰卧固定在手术台上。沿腹部正中线打开腹腔，作正中切口，暴露双侧肾并游离肾蒂。观察肾脏大体形态和颜色 对5只大鼠断尾采血 分别测定其血清肌酐浓度并记录数据。 摘取5只大鼠的左侧肾脏备用。 制备5只大鼠10%的左肾组织匀浆液 按试纸盒说明检测上清液中SOD活力。 （3）旋涡混匀器混匀，室温放置10分钟，于波长550nm，1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度 肾组织SOD活力测定 (1)称取100mg肾组织，放入盛有10ml生理盐水的匀浆玻璃器皿中，用匀浆器匀浆2分钟，倒一半入5ml试管中，离心5分钟，收取上清。 (2)按下表顺序用移液器和专用吸头把下述试剂加入另一个5ml试管。 SOD测定步骤 试剂 测定管 对照管 试剂 测定管 对照管 试剂1（ml） 1.0 1.0 试剂3（ml） 0.1 0.1 样品上清液