选修3DNA重组技术的基本工具上课用2016.ppt

催化形成的是磷酸二酯键，而不是氢键。 G C T T A A A A T T C G 磷酸二酯键 磷酸二酯键 二、“分子缝合针”— DNA连接酶 1.作用：将双链DNA片段连接，成为一个完整的DNA分子。 2.种类 (1) E.coli DNA连接酶： (大肠杆菌) 只能连接黏性末端 (2) T4 DNA连接酶： （T4噬菌体） 既可以连接黏性末端，又连接平末端，但连接平末端效率低。 小结：限制性核酸内切酶与DNA连接酶作用位点相同，作用结果相反。 DNA连接酶与DNA聚合酶作用有何不同？ 寻根问底 A G T A C T A A T DNA 母链 DNA聚合酶 DNA聚合酶 T T A G A T A T C C G A C G G T T T A A … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … DNA连接酶 寻根问底 思考 不同点： DNA连接酶是将___________连接起来, 模板 DNA聚合酶是将___________连接起来， 模板 都催化磷酸二酯键的形成 两个DNA片段 单个核苷酸 共同点： 不需要 需要 四、分子运输车——基因进入受体细胞的载体 1.载体的种类： 质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒 最常用的载体 质粒 拟核 大肠杆菌细胞 一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，能自我复制的小型环状双链DNA分子。 2.载体的条件： 假如质粒没有限制酶切割位点将怎样？ （没有限制酶能识别的序列） 质粒 限制酶 ？ 限制酶 ？ 限制酶 ？ 限制酶 ？ 目的基因 A.有一至多个限制酶切割位点，便于目的基因插入 目的基因 插入位点 重组DNA 受体细胞 受体细胞 假如质粒含有标记基因如：四环素抗性基因 含四环素的培养基 B.具有标记基因,便于重组DNA的鉴定和筛选 2.载体的条件： A.有一至多个限制酶切割位点，便于目的基因插入 受体细胞 C.在受体细胞中能自我复制或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA进行同步复制 B.具有特殊的标记基因,便于重组DNA的鉴定和筛选 2.载体的条件： A.有一至多个限制酶切割位点，便于目的基因插入 D.对受体细胞无害 质粒的模式图 质粒 DNA 大肠杆菌细胞 目的基因 插入位点 氨苄青霉素 抗性基因 复制原点 思考：如果受体细胞分别是动物细胞和细菌，所用的载体相同吗? 不相同，动物细胞是真核细胞，一般用动物病毒做载体；细菌是原核生物，一般用质粒做载体。 LOGO LOGO LOGO 专题一 基因工程 一、基因工程的概念 按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的。因此又叫做DNA重组技术。 基因工程依据的原理：基因重组 注意：这里的基因重组是指将来自不同的DNA分子进行“拼接”，与有性生殖过程中的基因重组不同。 别名 操作环境 操作对象 操作水平 实质 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 定向改变生物性状或获得基因产物 基因重组 设想一 能否培养出具有抗虫 性状的抗虫棉呢？ 基因工程培育抗虫棉的简要过程 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌（有抗虫毒蛋白） 提取 抗虫基因 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 重组DNA 导入 形成 1.1 DNA重组技术的基本工具 三种基本工具 手术刀 针线 运输车 在自然界中有一些生物的DNA可能进入另一种生物的细胞中。我们有没有学过相关的实例？ 二、“分子手术刀”--限制性核酸内切酶 （限制酶） 1.来源 主要是从原核生物中分离 2.作用 识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开（特异性） EcoRⅠ EcoRⅠ限制酶识别： GAATTC序列 3.结果：形成黏性末端 限制酶在识别序列的中心轴线两侧将DNA两条单链切开，这样的切口叫黏性末端。 SmaⅠ SmaⅠ限制酶识别： GGGCCC序列 3.结果：形成平末端 限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，这样的切口叫平末端。 LOGO LOGO LOGO