《中药炮制学》何首乌不同炮制工艺对蒽醌类含量的影响.docVIP

何首乌不同炮制工艺对蒽醌类含量的影响 实验目的 1.掌握何首乌的炮制方法。 2.考察不同炮制工艺对何首乌所含游离蒽醌和总蒽醌含量的影响 实验原理 何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb．的干燥块根。现代研究表明，何首乌含蒽醌类、二苯乙烯苷类、磷脂类、糖类等化合物，其中蒽醌类化合物为其主要有效活性成分，具有降血脂、抗衰老、增强免疫功能等药理作用。 何首乌炮制后游离蒽醌含量增加，总蒽醌含量下降，消除了生首乌滑肠致泻的不良反应。 本实验应用比色法测定何首乌经过不同工艺炮制后，游离蒽醌和总蒽醌的含量变化，为何首乌的临床应用提供实验依据。 实验材料 1.药材：生首乌饮片,黑豆 2.试剂: 1，8－ 二羟基蒽醌对照品，氯仿（AR），无水硫酸钠，2.5mol/L硫酸，0.5%醋酸镁甲醇溶液 3.仪器: 烧杯（300ml）、容量瓶（25ml）、移液管（0.5ml、1ml、2ml、2.5ml）、量筒（50、100ml）、回流装置、圆底烧瓶、回收装置、玻璃棒 4.设备:压力锅、电炉、721型分光光度计 （三）实验方法 1．何首乌炮制 1.1黑豆汁制法： 取黑豆10kg，加水适量，煮约4小时，熬汁约15kg，豆渣再加水煮约3小时，熬汁约10kg，合并得黑豆汁约25kg。 1.2分组对照实验 根据传统炮制方法将其分为黑豆组和清蒸组， 黑豆组：采用黑豆汁法炮制:取生何首乌块10 g， 用制好的黑豆汁拌匀,将其润湿并置于非铁质的适宜容器内保持密闭状态, 蒸或炖至汁液吸尽, 何首乌的液体呈棕褐色时可以取出, 于30~35 ℃下干燥， 每1 0 k g 何首乌块使用的黑豆约为1kg 清蒸组：清蒸组进行清蒸法炮制:取何首乌饮片10 g ,将其润湿并置蒸锅内密闭, 隔水分别蒸至药物内外呈棕色，再将其取出于3 0~3 5 ℃下干燥。 2..溶液的制备 2.1 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的1，8－ 二羟基蒽醌对照品1． 062mg，置10mL 量瓶中，加95% 乙醇溶解，并定容至刻度，得含1，8 － 二羟基蒽醌浓度为0． 1062mg /mL 的对照品溶液，备用。 2.2 供试品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的生、制首乌饮片各0． 5g，置具塞锥形瓶中，分别加入15mL 95%乙醇，在200W 功率下超声10min 后，滤过，残渣再加同浓度乙醇10mL 超声15min，滤过，合并两次滤液，摇匀，3000r /min 离心5min，精密吸取上清液0． 1mL 于25mL 量瓶中，用95%乙醇定容至刻度，摇匀，即得。 2.3 含量测定 2.3.1 检测波长的确定 取供试品溶液与对照品溶液各约4mL，以95%乙醇为空白对照，分别置于紫外分光光度计上在200 ～ 400nm 波长范围内扫描得出对照品1，8－ 二羟基蒽醌的最大吸收波长和供试品生首乌的最大吸收波长并以标准品吸收波长为准作为检测波长 2.3.2 标准曲线的制作 精密量取上述对照品溶液0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20mL，分别置于25mL 量瓶中，加95%乙醇定容至刻度，摇匀，以95%乙醇溶液为空白对照，于最大波长处测定吸光度。得吸光度Y 与浓度X的直线回归方程。并计算： C：有标准曲线求得的浓度（mg/ml），T:稀释度，W：样品重量（g） 2.3.3 精密度试验 精密吸取对照品溶液0． 6mL，置25mL 量瓶中，加95%乙醇至刻度，摇匀，按“2． 3． 2”项下方法测定吸光度5 次。 2.3.4 稳定性试验 移取同一供试品溶液约4mL，分别于放置0、2、4、8、12、24h 后，按“2． 3． 2”项下方法测定吸光度,得吸光度的RSD 2.3.5 重复性试验 精密称取同一批生首乌饮片6 份，分别按“2． 2． 2”项下方法制备供试品溶液，按“2． 3． 2”项下方法测定吸光度。法的重复性好, 得吸光度的RSD. 2.3.6 加样回收率试验 精密称取已知总蒽醌含量的何首乌饮片9 份，每份约0． 1g。分别精密加入1，8－ 二羟基蒽醌对照品相当于药材中总蒽醌含量的80%、100%、120%，按“2． 2． 2”项下方法制备供试品溶液，按“2． 3． 2”项下方法测定吸光度，计算加样回收率和RSD. 2.3.7 何首乌总蒽醌含量测定 取生首乌和制首乌饮片供试品溶液各5 份，按“2． 3． 2”项下方法测定吸光度，由回归方程计算总蒽醌含量。 设计的可行性 实验通过对比不同工艺炮制的何首乌的游离蒽醌和总蒽醌的含量变化来比较不同炮制工艺的优缺点，且从实验原理和实验所需