红拟石首鱼海豚链球菌分离、鉴定和致病性研究.pdf

第 29 卷 第 6 期 水 生 生 物 学 报 Vol . 2 9 ,No . 6 2 0 0 5 年 1 1 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA Nov. , 2 0 0 　5 红拟石首鱼海豚链球菌分离、鉴定及致病性研究 1 ,2 2 3 4 1 沈智华 　钱 　冬 　许文军 　顾金华 　邵健忠 ( 1 浙江大学生命科学学院 ,杭州 　310012 ;2 浙江省淡水水产研究所 ,湖州 　313001 ; 3 浙江省海洋水产研究所 ,舟山　316100 ;4 湖州市中心医院 ,湖州 　313000) 摘要 :2001 年 9 月 —12 月 ,浙江舟山部分网箱养殖红拟石首鱼发生了陆续死鱼 ,发病鱼表现为眼球突出、浑浊 ,失去 方向性 ,皮肤溃疡等症状 。从病鱼的肾脏和肝脏中分离到菌株 SO2 和 SO3 ,对两分离株进行了致病性试验 ,发现 两者对红拟石首鱼 、罗非鱼及小白鼠均有致病力 ,SO2 和 SO3 对红拟石首鱼 、罗非鱼及小白鼠的LD50 分别为 48 × 8 7 8 7 6 6 10 CFU/ 尾和 19 ×10 CFU/ 尾 、28 ×10 CFU/ 尾和 83 ×10 CFU/ 尾及 96 ×10 CFU/ 只和 42 ×10 CFU/ 只 ,试验感染 鱼出现眼球突出、浑浊及失去方向性等与自然发病相似症状 ,确定该两株菌为致病菌 。两分离株为革兰氏染色阳 β 性 ,呈链状球菌 , 溶血 ,10 ℃生长 ,45 ℃不生长 ;接触酶阴性 ,水解七叶灵 、精氨酸 ;VP 试验 、脲酶和马脲酸试验阴性 , 发酵葡萄糖 、水杨苷 、蔗糖和淀粉 ,不发醇阿拉伯糖 、菊糖 、乳糖 、蜜二糖 、棉子糖和山梨醇 。分离株对氨卞青霉素 、 万古霉素和先锋 Ⅴ等高度敏感 ,对庆大霉素 、复方新诺明、林可霉素 、氟哌酸等不敏感 。应用 16SrRNA 基因进行的 菌株 PCR 鉴定 ,确定该两株菌为海豚链球菌 。 关键词 : 红拟石首鱼 ;海豚链球菌 ;致病性 ;鉴定 ( ) 中图分类号 :S94142 　　文献标识码 :A 　　文章编号 2005 ( ) 　　红拟石首鱼 Sciaenops ocellatus , 又名美 国红 出现白片状花纹 。无菌操作取濒死病鱼肝脏 、肾脏 鱼 、红姑鱼 ,属鲈形 目石首鱼科 ,原产于北大西洋沿 组织 ,于 TCBS 、TSA 和自制肝浸液平板培养基 , 自制 岸及墨西哥湾 ,因其肉质细嫩 、生长快 、广温 、广盐等 肝浸液采用草鱼肝脏为原料 ,制备方法参考文献[ 1] , 优点 ,而成为迄今世界上养殖产量最高的鱼种之一 。 28 ℃培养 48h 后取单菌落作纯培养 。 1991 年引进 , 1995 年繁殖成功 ,现已在沿海各地网 12 　分离菌适宜培养 　用接种环沾取纯培养菌液 , 箱和池塘中广泛养殖 。然而 , 随着养殖规模的扩大 分别接种于 TSA 、普通肉汤琼脂 、BHI 琼脂平板 , 于 和放养密度的提高 ,红拟石首鱼的病害发生 日趋频