第1章 绪论-医学细胞生物学.pptVIP

* 电子显微镜与光学显微镜的成像原理基本一样，所不同的是前者用电子束作光源，用电磁场作透镜。另外，由于电子束的穿透力很弱，因此用于电镜的标本须制成厚度约50nm左右的超薄切片。这种切片需要用超薄切片机制作。电子显微镜的放大倍数最高可达近百万倍，由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系统、电源系统等5部分构成。 （二）细胞超微结构研究的技术与方法 常用电子显微镜和X射线衍射仪。 * JEM-1011透射电子显微镜 在光学显微镜下无法看清小于0.2μm的细微结构，这些结构称为亚显微结构或超微结构。要想看清这些结构，就必须选择波长更短的光源，以提高显微镜的分辨率。1932年Ruska发明了以电子束为光源的透射电子显微镜，电子束的波长要比可见光和紫外光短得多，并且电子束的波长与发射电子束的电压平方根成反比，也就是说电压越高波长越短。目前TEM的分辨力可达0.2nm。 1.透射电子显微镜 内质网透射电镜图 * 于20世纪60年代问世，用来观察标本的表面结构。其工作原理是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与电子束入射角有关，也就是说与样品的表面结构有关，次级电子由探测体收集，并在那里被闪烁器转变为光信号，再经光电倍增管和放大器转变为电信号来控制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。图像为立体形象，反映了标本的表面结构。为了使标本表面发射出次级电子，标本在固定、脱水后，要喷涂上一层重金属微粒，重金属在电子束的轰击下发出次级电子信号。 2.扫描电子显微镜（scanning electron microscope，SEM） * JEOL扫描电子显微镜 人类血细胞SEM照片 （1）组织分离法 （2）细胞培养法 （3）超薄切片法 （4）悬滴-复染法与喷镀法 （5）冷冻蚀刻复型法 （6）放射性核素电竞自显影技术 3.电镜样品的制备 二、细胞培养及相关技术 （一）体外细胞培养技术 （二）细胞融合技术 （三）细胞显微操作技术 * 三、细胞及亚细胞组分的分离和纯化技术 （一）细胞化学免疫荧光技术 细胞化学: 在保持细胞结构的基础上，利用某些化学物质可与细胞内某些成分发生化学反应，在局部形成有色沉淀物的原理，以示待查物质存在于细胞中的部位。 例如：Feulgen法——显示DNA * 免疫细胞化学（immunocytochemistry）: 根据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，对抗原进行定位测定的技术。 抗原：大分子或与大分子相结合的小分子。 抗体：由浆细胞针对特定的抗原分泌的γ球蛋白。 如果将抗体结合上标记物，再与组织中的抗原发生反应，即可在光镜或电镜下显示出该抗原存在于组织中的部位。 * （二）细胞显微分光光度测定技术 根据细胞内某些物质对光谱吸收的原理，用以测定这些物质如核酸和蛋白质等生物大分子在细胞内的含量。 吸收光谱的波长： 230 ～ 700nm Feulgen染色后的DNA吸收的波长：546nm 细胞显微分光光度测定技术：定位和定量 * （三）流式细胞计量术（FCM） 用氩离子激光发出的激光束为激发光，通过调节液压，迫使悬浮的细胞排成单列，按重力方向流动，当细胞通过激光束检测区时，细胞被激光束照射而向各个方向发出散射光，若经荧光染色的细胞，就会发出一定强度的荧光，仪器的检测系统，就可逐个对细胞的散射光和荧光强度进行测定，并将光信号转变成电信号，由电子控制台放大和显示。 * 测量速度：5 000个细胞/s＋ 8个相关参数 分选出细胞纯度：90～99% 检测的参数：细胞大小、体积、DNA、RNA、总蛋白含量、表面抗原、受体、染色体等 应用：细胞动力学、免疫学、体细胞学、肿瘤的诊断和治疗等。 流式细胞仪特点 * * * * 延边大学医学院 细胞生物学与医学遗传学教研室 张子波 * 教 材：《医学细胞生物学》 主 编：杨康鹃 郑立红 出版 社：人民军医出版社 * 参考书： 1.《医学细胞生物学》 主 编：胡以平 出版社：高等教育出版社，2009 2.《医学细胞与分子学基础》 主 编：陈仁彪 出版社：上海科学出版社，2003 第1章 绪 论 * 细胞生物学(cell biology)： 从细胞水平（整体、亚微结构、分子）探讨生命活动规律的科学。 第一节 细胞生物学研究内容、 发展及其分科 医学细胞生物学(medical cell biology)： 运用细胞生物学的理论和方法，研究人体的细胞的形态结构和功能等生命活动规律和人类疾病发生、发展及其防治的科学。 * 对象：细胞