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2017-06-03 发布于湖北
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MLPA原理.pptx

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MLPA原理要点

MLPA技术原理 MLPA 多重连接依赖探针扩增技术（multiplex ligation-dependent probe amplification） MLPA技术最早由荷兰学者Dr.Schouten JP于2002年提出, 是近几年发展起来的一种针对待检DNA序列进行定性和半定量分析的新技术。MLPA可以快速同时鉴定几十个基因的缺失和插入，可用于血液，肿瘤样本的DNA，mRNA的表达谱分析。而且，MLPA方法可用于甲基化分析。该技术具有高效、特异性，可在同一反应管内检测多达50个核苷酸序列的拷贝数变化。 MLPA目前的应用领域： 1.检测小的重排 2.检测大范围的染色体重排 3.检测亚端粒区的拷贝数改变。 4.检测染色体非整倍体改变。5.肿瘤诊断 6.甲基化定量检测 7.mRNA分析细胞凋亡和炎症反应。样本DNA变性探针与靶序列杂交探针特异化连接连接探针的扩增结果的检测分析 MLPA实验流程图一.样本DNA变性 1.提取样本DNA。 2.DNA溶解后，冷却至室温，进行纯度及浓度检测。二.探针与靶序列杂交针对每个待测基因目标序列设计了一对探针，这一对探针包括一条经化学合成的短探针（5‘ 端探针）和一条经M13 噬菌体衍生法制备而来的长探针（3’ 端探针）组成。短探针长约50-60bp，长探针长约60-450bp。填充序列：长度特异填充片段，由于填充片段长短不一而可以区分不同的探针。三.探针特异化连接连接后探针长度在130nt-480nt之间，相邻两探针相差6-9nt。 MLPA技术的特色是：1.仅扩增连接完好的探针，而不是扩增样本靶序列。 2.在一个反应体系中，所有连接探针的PCR 扩增用的是同一对引物。四.连接探针的扩增