牛干扰素-tau基因的原核表达与生物功能鉴定.pdfVIP

农业生物技术学报 Journal ofAgriculturalBiotechnology 2008,16 (2): 208­213  ·研究论文 · 牛干扰素 ­tau 基因 的原核表达及生物功能鉴定 *  1  2  1  ,  ,  ** 高方方  吴忠义  曾申明  1. 100094 2. 100097 （ 中国农业大学动物科技学院， 北京 ； 北京市农林科学院生物中心， 北京 ） ： PCR ­tau bovine interferon­tau, ， 并克隆到 pGEM­T 摘要 采用 方法直接从牛早期胚胎细胞 中扩增牛干扰素 （ ） 基 因 载体中。 然后将含信号肽和不含信号肽 的 片段分别与原核表达载体 pET­30a(+)连接， 并用 IPTG诱导表达。 重组蛋白经 2+ 。 实验结果显示， 以胚胎裂解液为模板 、 不 Ni  亲合层析纯化后 ， 通过抗病毒检测和对靶细胞形态变化 的影响检验其生物学功能 （ DNA 5 GenBank XM­593584 提取胚胎基 因组 ， 可 以从少量 枚 ） 的牛囊胚 中直接扩增 出 基 因 ， 与 （ ） 序列相 比， 核苷酸和 99% 97% ， 经 SDS­PAGE 20kD 氨基酸的同源性分别为 和 ； 不含信号肽序列的重组质粒诱导表达后 电泳检测发现约在 处出现 4  特异性蛋 白条带 ， 与 目标蛋白分子量一致； 纯化后重组蛋 白的抗病毒活性单位为 1 10  IU/mg； 在牛子宫 内膜上皮细胞培养液 伊   2.9 g/mL rbIFN­ 24h