11农第01-6讲.pdfVIP

§1- 6 蛋白质的性质与分离纯化 • 蛋白质的性质与其分子大小、结构及其组成—— aa的性质密切相关。 一、分子量： • Pr为高分子有机物，分子量几千— 几千万。 • 分子量测定方法：根据化学组成测相对分子量； 渗透压法； 超速离心法； 凝胶过滤法； 聚丙烯酰胺电泳法 光散射法等。 二、两性电离与等电点 • 根据此性质采用电泳法分离鉴定蛋白质。 • 此多用于科研、生产、临床诊断等。 三、胶体性质 • 蛋白质水溶液为亲水胶体： 因为分子周围有双电子层和水化层，有利 于稳定pr胶体系统。 水化层： pr分子表面的亲水基团与水分子 形成。 双电子层：在一定pH下， pr分子表面的可 解离基带相同电荷，与环境中相 反离子构成稳定的 ‾。 四、沉淀反应 • 机理：破坏pr胶体溶液的稳定性： 1）改变pH，利用等电点破坏双电子层； 2）加入电解质破坏双电子层； 3）加入脱水剂破坏水化层。 • 方法： 盐析、等电点沉淀、加有机溶剂等。如： 盐、醇、酸、重金属离子、生物碱试剂等 五、呈色反应 反应 试剂 颜色 反应基团 双缩脲反应 NaOH,稀CuSO4 紫或粉 2个以上肽键 Millon反应 Millon,硝酸，亚硝酸 红色 酚基 黄色反应 HNO 及NH 黄、橘黄 苯环 3 3 乙醛酸反应 乙醛酸H SO 紫红 吲哚 2 4 坂口反应 次氯酸钠,萘酚，NaOH 红色 胍基 Folin酚试剂反应 CuSO 磷钨酸-钼酸 兰色 酚基 4 茚三酮反应 茚三酮 紫兰色 游离氨羧基 六、蛋白质的分离纯化 （一）分离pr的各种方法依据pr的如下性质： 1、分子大小 2、溶解度； 3、电荷； 4、吸附性质； 5、对其他分子（配基）的生物学亲和力。 （二）蛋白质分离纯化的基本原则 • 选择好的材料 • 摸清目的蛋白质的稳定性 • 探索有效的抽提法和浓缩法 • 建立一套层析的组合 • 以较好的方法贮存 （三）蛋白质分离常用的方法 • 透析 • 透析 • 超速离心 • 超速离心 • 盐析 • 盐析 • 有机溶剂沉淀 • 有机溶剂沉淀 • 等电点沉淀 • 等电点沉淀 1、透析与超滤 • 利用pr不能 通过半透膜。 2、盐析与盐溶 1) 盐溶(salting in)： 适量中性盐可增加pr溶解度的现象。 机理：是因pr吸附盐离子形成的带电层使 pr分子相互排斥；而pr与水的作用加 强，溶