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《生物电镜技术》学习指导 基础知识 1、世界上第一台透射电镜发明于1931年。 2、人眼观察物体的能力是由视角、亮度、反差等视觉要素所决定的。 3、正常人眼在明视距离250㎜的分辨率是0.2㎜。 4、电子透镜可分为静电电子透镜和磁电子透镜。现代电镜中只有在电子枪中应用的静电电子透镜是由阳极、栅极和阴极组成。 5、电磁透镜的像差有几何相差、像散、色差和衍射差。 6、电子与固体样品发生作用时，可产生的各种信息有透射电子、二次电子、俄歇电子、X射线、 背散射电子、吸收电流。 7、透射电镜的基本组成可分为电子光学部分、真空排气部分和电气部分三大部分。 8、生物样品的反差主要是由物质的质量厚度决定的。 9、判断电镜图像焦是否精确常采用图像摇摆法和费涅尔条纹法。当放大倍数小于5万倍时用图像摇摆法，大于5万倍时用费涅尔条纹法。 10、扫描电镜的特点是图像景深大、立体感强和样品的适应性强。 11、扫描电镜主要是由电子光学系统、信号检测及显示系统、真空系统和电源系统组成。 12、扫描电镜观察用显像管是长余辉的，而摄影管是短余辉的。 13、常用的支持膜有Formvar 膜、火棉胶膜、帕罗丁膜和碳膜。 14、微筛的制作方法有哈气法、甘油法和气压法。 15、常用的固定方法有单固定法、双固定法、原位固定法和灌流固定法。 16、常用的脱水剂有乙醇、丙酮等。 17、常用的负染色方法有滴染法、漂浮法和喷雾法。 18、扫描电镜生物样品干燥方法有自然干燥法、真空干燥法、冷冻干燥法和临界点干燥法。 19、覆盖于载网之上的一层电子透明的薄膜称为支持膜。 20、常用的固定剂有醛类、四氧化锇和高锰酸钾。 21、扫描电镜生物样品制备的主要步骤有清洗与固定、脱水与干燥和增强导电性。 22、用来置换脱水剂而后又被干燥剂所置换的液体物质称为中间剂。 名词解释 1、视角：由物体两端通过眼的光学中心的联线所成的角。 2、极靴：在包壳透镜空心处加装的一对导磁率极高的铁钴金制件。 3、像差：指实际光学系统和理想光学系统成像的差别。 4、场深：电镜的场深是指透镜物方轴上的一段距离，在此距离内，当调节物镜电流改变焦点时，图像始终清晰。 5、焦深：在透镜的像方存在着的一个与场深等效的轴间距离，在这段距离上，假定物的位置保持不变，只移动像，像一直是清晰的。 6、二次电子：样品原子的核外电子受入射电子激发后，逸出样品表面时的电子。 7、倾斜角效应：当入射电子束强度一定时，二次电子信号的强度随样品倾斜角增大而增加。 8、边缘效应：在样品边缘和尖端部位二次电子极易脱离样品，产生较多的二次电子，图像异常明亮。 9、像素：指构成扫描电镜图像的许多明暗相间的小点，即构成图像的基本单元。 10、支持膜：指覆盖于载网上的一层电子透明的薄膜。 11、载网：在透射电镜技术中使用的一种圆片状极细的网状材料。 12、取材：从动植物有机体上或从培养物中取得所需材料的操作。 13、固定：用化学或物理的方法迅速杀死细胞的过程。 14、脱水：指用适当的有机溶剂取代组织细胞中的游离态的水。 15、负染色技术：又称为阴性反差染色技术，是指通过重金属盐在样品四周的堆积而加强样品外围的电子密度，使样品显示负的反差，衬托出样品的形态和大小。 16、有效放大：人眼的分辨率与显微镜的分辨率的比值。 17、电子透镜：指轴旋转对称的电场或磁场，对带电粒子有聚焦作用。 18、质量厚度：即样品的质量与厚度的乘积。 19、电子探针：指扫描电镜中用于在样品表面做光栅状扫描的极细的电子束。 三、问答题 1、生物样品取材的基本原则和要求。 生物材料在离开机体或正常的生长环境之后，其组织结构往往在自溶酶的作用下，迅速发生各种死后变化，为尽可能保持生物材料生活状态时的结构，取材操作应遵循以下原则和要求：①准确：应根据研究目的与要求，准确定位而后取材，取得的材料要具有代表性。②迅速：取材速度要快，动物材料体后须在1分钟或更短的时间内立即投入固定液中，以减少自溶作用的影响。③体积小：固定剂的适能力较弱，（O3O4为0.25㎜，或戊二醛为0.5㎜）为保证固定剂能浸入到材料的各个部位，一般要求样品体积的大小不超过1㎜3或截面为1㎜2的长条。④低温：生物材料离体后，组织细胞中的各种酶尤其是溶酶体中的水解酶将释放到组织中，使构成组织结构的主要成分如蛋白质、核酸等迅速降解，造成自溶。为降低酶的活性，要求在0-4℃的低温条件取材，所用的容器及器械等应预先冷却。⑤防损伤：取材器械要锋利，动作要轻巧，防止牵拉、挤压，造成组织细胞内部结构的损伤破坏。 2、透射电镜制样中的双固定法及其原理。 双固定法即戊二醛—锇酸双固定法，先用戊二醛前固定，再用锇酸后固定。戊二醛毒性不大，有两个醛基，对细胞的结构有很高的亲和力，能稳定糖元，保存核酸、核蛋白，尤其对微管、内质网等细胞膜系统和细胞质