PCR扩增及相关技术.PDF

扩增及相关技术 PCR PCR PPCCRR扩增及相关技术 PCR扩增及相关技术 PPCCRR PPCCRR 基因组DNA提取、电泳分析与酶切 DDNNAA 基因组DNA提取、电泳分析与酶切 DDNNAA 浙江大学生物技术研究所 陈卫良 I. PCR技术概论 II.. PPCCRR技术概论 I. PCR I. PCR技术概论 II.. PPCCRR II.. PPCCRR 一、 PCR技术的基本原理 PPCCRR PCR(Polymerase Chain Reaction ) ，聚合酶链反应 是 PPCCRR((PPoollyymmeerraassee CChhaaiinn RReeaaccttiioonn )) DNA RNA 3 一种选择性体外扩增 或 的方法。它包括 个基本 DDNNAA RRNNAA 33 步骤：(1). 变性(denature):目的双链DNA在94℃下解链； ((11)).. ((ddeennaattuurree)):: DDNNAA 9944 (2). 退火(anneal)：两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左 ((22)).. ((aannnneeaall)) ((5500 ) (3). 右 下与模板上的目的序列通过氢键配对； 延伸 )) ((33)).. （extension)：在TaqDNA聚合酶合成DNA的最适温度 eexxtteennssiioonn)) TTaaqqDDNNAA DDNNAA DNA 3 下，以目的 为模板进行合成。由这 个基本步骤组成 DDNNAA 33 一轮循环，理论上每一轮循环将使目的DNA扩增一倍， DDNNAA DNA , 这些经合成产生的 又可作为下一轮循环的模板 所以 DDNNAA ,, 6 经25-35轮循环就可使DNA扩增达1066倍。 2255--3355 DDNNAA