碳酸氢钠对嗜水气单胞菌致病性和其主要毒力相关基因表达的.PDF

 文章编号：１６７４５５６６（２０１７）０２０１９７０６ ＤＯＩ：１０．１２０２４／ｊｓｏｕ．２０１６０６０１７９７ 碳酸氢钠对嗜水气单胞菌致病性及其主要毒力相关基因表达的影响 １，２，３ １ １ 陈江凤 ，王广军 ，郁二蒙 （１．中国水产科学研究院珠江水产研究所 农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室，广东 广州　５１０３８０； ２．上海海洋大学 水产与生命学院，上海　２０１３０６；３．贵州大学 动物科学学院，贵州 贵阳　５５００２５） 摘　要：为探讨碳酸氢钠对嗜水气单胞菌毒力基因表达的影响，利用荧光定量ＰＣＲ技术，以未添加碳酸氢钠 的嗜水气单胞菌为对照组，添加０．０２４、０．０４８、０．０７２、０．０９６和０．１２０ｍｏｌ／Ｌ碳酸氢钠的嗜水气单胞菌为实验 组，对嗜水气单胞菌的３个主要毒力基因———溶血素基因（ＡＨＨ１）、气溶素基因（ＡｅｒＡ）和弹性蛋白酶基因 （ａｈｙＢ）进行相对表达分析。结果表明，５个实验组嗜水气单胞菌的ＡＨＨ１、ＡｅｒＡ和ａｈｙＢ表达量均显著低于对 照组。且随着碳酸氢钠浓度的增加，基因表达呈逐渐下调趋势。人工感染结果表明，添加碳酸氢钠培养的嗜 水气单胞菌对斑马鱼的半致死量明显比对照组高，而且随着碳酸氢钠浓度的增加，嗜水气单胞菌对斑马鱼的 半致死量呈现逐渐加大的趋势，表明毒力逐渐减小。 关键词：嗜水气单胞菌；碳酸氢钠；致病性；ＦＱＰＣＲ；毒力因子；基因表达 中图分类号：Ｓ９１７　　　文献标志码：Ａ 　　嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）是革兰 质，因存在种属特异性而成为致病性菌株的象 ［１］ ［１１］ 氏阴性菌，隶属气单胞菌科、气单胞菌属 。该 征 。研究表明ＡｅｒＡ缺失株对小鼠的半致死量 菌广泛存在于所有的内陆水环境、水底沉积物和 ［１２］ 是野生株的２０倍以上 。气溶素具有溶血性、 水生生物体中，有致病性和非致病性菌株之分。 ［１３］ 肠毒素毒性以及细胞毒性，抗胰酶，不耐热 。 致病性嗜水气单胞菌频繁地威胁到鱼类健康，尤 气溶素与红细胞表面的特定糖蛋白受体结合，通 其是在密集投饵的高密度水产养殖中。它是养 过聚合作用形成毒素六聚体，插入到红细胞的脂 殖鱼类潜在的致病菌，能引起包括赤皮病、细菌 质双分子层中，形成孔洞，增强细胞膜渗透性，导 ［２］ ［１４］ 性败血症等鱼类疾病 。在我国，此菌曾引起南 致细胞破裂死亡 。弹性蛋白酶（ａｈｙＢ）是嗜水 方各省鲫、草鱼、鲢、鳙等鲤科鱼类爆发败血症， 气单胞菌的重要毒力因子，能够水解弹性蛋白， 给养殖户带来极大经济损失［３］。 且与其他的金属蛋白酶具有高度的序列相似性， 嗜水气单胞菌存在多种毒力因子，这些毒力 ａｈｙＢ突变株的半致死量比野生株高 １００倍以 因子与该菌的致病性存在密切关系。已知的毒 ［１５］ 上 。 ［４］ ［５］ ［６］ 力因子有溶血素 、气溶素 、胞外蛋白酶 、外 在一定条件下，碳酸氢钠能抑制细菌生 ［７］ ［１６］ 膜蛋白 等。溶血素（ＡＨＨ１）是嗜水气单胞菌的 长 ，已有研究表明碳酸氢钠对大肠杆菌、乳酸 ［８］ 主要毒力因子之一 ，能引起幼鼠肠道积液，并