人B7.2(CD86)胞外区原核表达及其工程菌发酵培养的实验研究.pdfVIP

第 卷第 期 西 安 医 科 大 学 学 报 23 1 Vol.23 No.1 年 月 Feb. 2002 2002 2 JOURNALOFXIAN MEDICALUNIVERSITY 人 （ ）胞外区原核表达 B7.2 CD86 及其工程菌发酵培养的实验研究 闫晓彩，来宝长，郑 瑾，马 军，韩俊宏，王一理，司履生 （西安交通大学医学院免疫病理研究室，西安 ） 710061 摘 要：目的 利用原核系统表达人 （ ）并对工程菌发酵培养条件进行优化。 B7.2 IV +C g 方法 用聚合酶链反应（ ）技术从 全长中克隆 （ ），将 产物克隆 PCR B7.2cDNA B7.2 IV+C PCR g 入表达载体 从而得到重组体 ／ （ ）， 及 GEX-4T-3 GEX-4T-3hB7.2 IV+C SDSWestern p p g 用于检测目的蛋白的表达，同时对目的蛋白诱导表达时间及诱导剂浓度进行优化，对重组质 blot 粒的遗传稳定性进行鉴定。结果 结果显示相应分子质量 处有 （ Westernblot 55kD hB7.2 IV g ）与 融合蛋白的高效表达，表达量占菌体总蛋白的 左右。对工程菌进行发酵培养 +C GST 30% 研究的结果表明，所构建的重组质粒在工程菌 中传代稳定，未见质粒丢失，目的蛋白的表 DH5α 达不受影响，且在 -1 诱导 、 终浓度为 · 时其表达量最多。结论 证明了利 37࠷ 5h IPTG 4mmolL 用原核系统表达人 （ ）的可行性。 B7.2 IV+C g 关键词： （ ）；共刺激；融合蛋白； B7.2CD86 GST 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） 392.11 A 0258-0659200201-0004