串联亲和纯化技术在研究细胞内相互作用蛋白质中的应用.pdfVIP

·1153· 串联亲和纯化技术在研究细胞内相互作用蛋白质中的应用 刘 侠1△(综述)，韦薇2※(审校) (1．广西医科大学研究生院，广西53002l；2．广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科，广西530021) 中图分类号：Q503 文献标识码：A 文章编号：1006-2084(2014)07-1153_014 doi：lO．3969／j．i∞n．1006．2084．2014．cr7．00l 摘要：为了进一步研究蛋白质功能并建立蛋白质在细胞内的相互作用网络，各种研究相互作用 作用，两步纯化得到相关蛋 蛋白质的方法应运而生，串联亲和纯化(TAP)技术就是其中之一。TAP利用基因重组技术将标签基 白质。 因融合入靶蛋白基因，转入细胞系后表达带标签的靶蛋白。使用标签的特异性对靶蛋白进行纯化和 1．2 TAP技术优点该方 相关研究，而该技术在实际运用会遇到标签选择、标签位置的选择和重组表达等一系列问题，该文介 绍TAP技术在实际使用中的技术要点。 法的主要优点概括有四方 关键词：串联亲和纯化；相互作用蛋白质；蛋白质组学 面：①可以在细胞生理状态 下或者接近生理状态表达融 11瞎A坤帖∞缸蛐ofT柚d咖Amn蛔nI渤廿蛐n曲皿oIo盯ofh缸睇棚ul盯№i璐m蛔哺cti∞ L彤‰1，阮，耽一(1．‰d眦抬＆触埘0厂G∞懈i肘e出c以№i螂1豇y，2．D印dn删。厂Br∞nS￡哪w。 合靶蛋白，研究靶蛋白及其 cd，啪r舶印缸越A册沁以幻‰蝉i胍疵越￡『nlt∞酊。№删醒53002l，傩打m) establish 0f into Ah觚证：Tb tllepmtein．proteininter酏ti∞netwDrkinⅡaceUul盯肌dpmvideinsi异}It 未知的相关蛋白复合体，更 intemction proteinfIl肿ti∞，tlIe印pIu∞h髓of eme瑁ed扯cordindy，锄dtaIldem疆inity predictingprotein 真实地反映蛋白质在生物体 oneofme uses to pⅢ曲枷on(TAP)technolo盯isappmach髓，whichrecombinati咖technologyillfhse幽nity intotlle tlleceUlines wi山fused tllerecombi- taggene targetpmteingene，and elp糟鹊targetprotein tag，tllen 内的功能；②经过两次洗脱， n锄t is funherstudied tafldemamnity tlle proteinpurined如d bv疵nityta异．The purificati蚰techn010灯in encounteraseriousof suchas 降低了非特异蛋白量，相比 pmcticalappli枷锄wiU pmbIems tagselection，taEp∞itionselection。and recombinant technicalofTAPin u鸵． exp哪ion．Heremainlyinm)duc鹳tlIepoints practical 较于酵母双杂交更敏感