gsg-第二章 生物样品的制备.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 应用圆底瓶进行冷冻干燥的步骤 1.样品置耐压的圆底烧瓶中，将瓶浸入干冰-乙醇混合物内，使瓶内物迅速冻结成硬块，然后连接高真空度的真空泵。 2.如霜层全部融化，用手接触烧瓶不感到冷，就表明升华已经停止。 3.为了效果更好，可适当升温或延长真空时间以彻底脱水。 冷冻干燥的注意事项 1.连接泵的管道口径不宜过小，否则降低干燥效果。 2.减压时加温（45℃）可以加速蒸发，但以不使样品解冻为限。 3.烧瓶外通常蒙上一层霜，如果霜层开始融化，冻块起泡应立即停止。检查并排除故障后将样品重新冻结，继续冻干。 * 旋转冷冻离心式冻干机 其主体类似于小型离心机，转头多为六角形，有24孔或36孔位，可放1.5/2.0ml离心管，转速1800rpm.与真空泵相连。 原理：高速旋转中的样品上面的压力降低导致迅速蒸发，利用蒸发的冷却作用可以使样品降温直至冻结。 应用：适用于快速小量的样品，而无需制冷设备，尤适于分子生物学实验室制备核酸等微量样品。 * 优点： 1.在常用的冻干机中，如果使样品上面的压力降低就会引起沸腾和起泡，导致样品损失量。应用旋转冷冻装置可以避免。 2.旋转的离心力能够迫使部分样品沿管壁升高，从而减少样品的厚度，增加表面积。 3.并不需要在整个冻干过程中连续旋转，样品冻结后转子停止旋转而冻干过程仍然继续进行。 旋转冷冻离心式冻干机 * 高真空冰冻干燥 将生物大分子的水溶液冰冻，然后在低温和高真空下使冰升华，留下固体干粉的过程。 适用样品： 对热敏感、易吸湿、易氧化及溶剂蒸发时易产生泡沫而引起变性的生物大分子。 * 操作： 1.待冻干的样品放在不同容量的干燥瓶中，连接到干燥室的接口点上，小容量的样品可放入安瓶或小瓶置于干燥室的层架上。 2.冷凝管及热管连于干燥室（形成冷阱），分别用于冷却或加热样品。 3.凝结器内装螺旋状冷气盘管，使其工作温度低于干燥箱内样品温度。（-60 ~ -40℃） 4.真空泵可将系统抽至真空。 5.加热系由电加热元件完成，用来除霜和辅助蒸发 6.控制面板装有真空泵、温度指示器，实时监测仪器的运行情况。 高真空冰冻干燥 * 注意事项： 1.样品溶液最好溶于水，而不含有机溶剂。 2.样品中盐浓度高，冻块易融化，影响样品活性及延长干燥时间。可脱盐或使用挥发性盐或缓冲液。 3.一些物质（如过氧化氢酶）因pH改变或低温影响可能变性失活，须加入适当的稳定剂。 4.装样容器应能耐受外压并传热性能良好，常用圆底烧瓶、玻璃安瓶、青霉素瓶等。 5.加液量不应超过容器的有效体积的1/5。 高真空冰冻干燥 * 条件控制： 1.在并没有全部升华之前不要搅动样品液冻块。 2.在除去瓶壁冰壳或移动容器时，应避免水蒸气流量徒然增加导致冲散样品。 3.冻干机最好安装在有空调的房间。 4.冻干过程中，容器外壁通常结霜，这表明系统工作良好。 5.结束冻干时，缓慢放入空气，避免急速的气流冲散冻干品。 6.结束冻干顺序：系统内部压力升至大气压后，取出样品容器，关闭真空泵。最后，关停冷冻机或移去冷阱。切记：次序不能颠倒！ 7.冻干品可以移入小瓶，用蜡密封，如果是安瓶，可用扁平火焰熔封，保存于冰箱内。 8.真空泵是冻干机的关键组件，应注意维护保养，时常监测油标指示，按时换油。 高真空冰冻干燥 * 生物样品的保存 在生物样品的保存过程中，影响样品、药物或制剂质量的因素很多，主要有空气、温度、水分、光线、酸碱度、样品的状态、微生物活动、保存时间和容器等。 方法：1.密闭保存 2.低温保存 3.固态干燥保存 4.避光保存 5.添加稳定剂 6.制成高稳定性的盐类或衍生物 * 注 意 事 项 1.保存的样品一律要贴标签； 2.定期检查； 变质样品：发霉、变色、沉淀、挥发、酸 败、异味、潮解、粘结等。 3.不同样品应按性质分类保存。 种类：1.普通实验室冰箱（-20~4?C） 2.低温冰箱（-40?C） 3.超低温冰箱（-80?C） 4.程控制冷式冰箱 立式、卧式 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 透析 扩散原理 半透膜（纤维素)-大分子被截留，盐和小分子扩散通过 更换透析液，磁子搅拌 用于样品除盐、少量有机溶剂、生物小分子等；保留液体积经常增加（可达50%） 超滤 加压膜分离技术，一定压力下小分子溶剂和溶质透过一定孔径的膜（乙酸纤维或硝