DNA和RNA的提取与纯化.pptVIP

mRNA分子 原核生物和真核生物的mRNA在结构上有所不同： 1) 原核生物的mRNA是多顺反子的，真核生物的mRNA是单顺反子的； 2) 原核mRNA 5端无帽子结构，真核mRNA 5端有一段帽子结构（m7GpppNmpNmp-）； 3) 原核mRNA 3端无PolyA，真核mRNA 3端有PolyA。 mRNA分子 含量少，单链分子大小不一，也能形成茎环结构。 mRNA是蛋白质生物合成的模板。 每一种蛋白质都有对应的mRNA，种类多。 2、真核生物mRNA的分离 （1)得到总RNA后，可用oligo(dT)-纤维素层析法提取mRNA[poly(A)+RNA ]. 其原理是大多数真核mRNA 3’端带有足够长的多聚腺苷酸残基，可通过其与挂有寡聚d(T)的纤维素亲和形成稳定的RNA－DNA杂合链，不含polyA的RNA从介质中洗去后，应用低盐缓冲液解离双链结构，并从介质中洗脱poly(A)+RNA, 从而使mRNA得以纯化。这些相异的mRNA分子合起来，实际上编码了细胞内所有的多肽。有柱层析的方法和批量层析两种。 （2)提取mRNA的另一种方法是包被抗生素蛋白链菌素的聚乙烯磁珠法 其优点是可以直接从含异硫氰胍的裂解液中分离mRNA。 在典型的实验中，组织、细胞或细胞悬液用硫氰胍裂解，将带生物素的oligo（dT）引物直接加入裂解液，放置一段时间，使引物与细胞m