第3讲 仪器分析第四版高效液相色谱.pptVIP

第三章 高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography;*;*;*;*;*;四、高效液相色谱 （一）高效液相色谱（HPLC）含义： 高效能固体细微粒为固定相 高压溶剂为流动相 高灵敏度检测器;*;（二）高效液相色谱与其它色谱方法的比较;2. HPLC与GC的比较;按固定相的聚集状态分类： 液-固色谱法 液-液色谱法 按分离机制分类： 分配色谱法 吸附色谱法 离子交换色谱法 空间排阻色谱法;其它分离机制色谱法： 亲合色谱法 AC 胶束色谱法 MC 手性色谱法 CC 毛细管电色谱法 CEC;第二节 高效液相色谱仪;高压输液系统：储液器、吸滤器、高压 输液泵、脱气装置及梯度洗脱装置 进样系统：进样器，进样阀 分离系统：色谱柱，恒温箱 检测系统：检测器 记录系统：记录装置、色谱工作站;1、贮液器和吸滤器：;2、高压输液泵;活塞型往复泵 ——液相色谱仪中使用最广泛的恒流泵 ;离线超声波振荡脱气 在线惰性气体鼓泡吹扫脱气 在线真空脱气装置;4、梯度洗脱装置：;二、 进样系统;三、 色谱柱;四、 检测系统;石英窗;四、 检测系统;2、荧光检测器;3、蒸发光散射检测器;光源;接参比电极 和对电极;;五 、 数据处理和计算机控制系统;1、要求： 粒径小、颗粒分布均匀 传质快、渗透压小 机械强度高、能耐高压 化学稳定性好;一、固定相;（2）按孔隙深度分 表面多孔型：实心玻璃珠为基体，基体表面覆盖一层多孔活性材料 适于常规分离分析 全多孔型：全部由硅胶或氧化铝微粒聚集而成 适于复杂混合物的分离。;3. 常用固定相 液固色谱固定相 常用粒径3~10μm，理论塔板数过 5 万/米 无定形全多孔硅胶：YWG 球形全多孔硅胶：YQG 高分子多孔微球：YSG;3. 常用固定相 化学键合固定相 以硅胶为载体，借化学反应方法将有机分子以共价键连接在硅醇基上;Si-O-R： 热不稳定、易水解，适于不含水或醇的流动相 Si-R(或Si-N)： 不水解，热稳定性较好。但格式反应不方便。使用水溶液作流动相时，其pH应在4-8之间。 Si-O-Si-R： 不水解，热稳定性好，pH2-8范围内对水稳定;3. 常用固定相 化学键合固定相 非极性键合相：十八烷基键合相（ODS，C18?? 中等极性键合相：醚基键合相 极性键合相：氨基、氰基键合相;3. 常用固定相 其它固定相 离子交换固定相：离子交换树脂、键合型离子交换树脂 空间排阻色谱固定相：凝胶 手性固定相：手性官能团键合或天然手性物质固着在载体上如环糊精 亲合色谱固定相：生物专一性配基+载体;二、流动相——淋洗液，洗脱剂;2、流动相组成;正相色谱：极性固定相——非极性流动相（加极性调节剂如氯仿）——极性柱（正相柱）;*;正相色谱;*;*;*;1、选择因子;*; 2、分配系数K;*;*;*;六、色谱分离速率方程 —范第姆特方程（Van Deemter equation）;第四节 HPLC分离条件的选择;（1）固定相： ①粒度小，均匀，以减小涡流扩散和流动相传质阻力； ②改进结构，采用大孔径和浅孔道的表面多孔型载体或全多孔微粒型载体，减少滞留流动相传质阻力。;（2）流动相： 低粘度的流动相——增大组分 在溶剂中的扩散系数Dm——减少传质阻力 （3）流速： 最佳流速在流速很小处，减小流速有利提高柱效 常采用比最佳流速高数倍的流速——加快分析速度;（4）柱温： 提高柱温——降低流动相粘度——减少传质阻力——分辨率降低，柱寿命短，易产生气泡， 一般在室温下进行;第五节 HPLC的建立与应用;;一、建立HPLC分析方法的一般步骤 ;一、建立HPLC分析方法的一般步骤 ;一、建立HPLC分析方法的一般步骤 ;二、HPLC定性定量分析方法;二、HPLC定性定量分析方法;1、在食品分析中的应用 食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、矿物质等； 食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着色剂、抗氧化剂等； 食品污染物分析：霉菌毒素、微量元素、多环芳烃等。 2、在环境分析中的应用 多环芳烃、农药（如氨基甲酸脂类）残留等。;3、在生命科学中的应用 分子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学等必不可少的工具 低分子量物质：氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素等分离和测定 高分子量物质：多肽、核糖核酸、蛋白质和酶的纯化、分离和测定;4、在医学检验中的应用 体液中代谢物测定；药代动力学研究；临床药物监测： 合成药物：抗生素、抗忧郁药、黄胺类药等 天然药物：生物碱（吲哚碱、强心甙）等 5、在无机