四基因克隆的质粒载体.ppt

根据质粒的转移功能分类 第一个用于基因克隆的天然质粒pSC101，它含有一个EcoR?酶切位点，一个四环素抗性选择记号（Tetr ），插入外源片段后不影响其复制功能，但该质粒分子量较大，拷贝数低只具有抗菌素抗性基因，无法使用插入失活技术选择重组分子。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. ColE1质粒在其唯一的单切割位点EcoRl中克隆外源DNA片段后，可根据对大肠杆菌素E1的免疫性选择转化子，不能合成大肠杆菌素E1的菌落是具有重组质粒的转化子。但对大肠杆菌素E1的免疫筛选，在化学上是相当麻烦的。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 2.理想的质粒载体必须具备的基本条件 (1) 具有复制起点 自我增殖的基本条件，一般具一个复制子。 (2) 具有抗菌素抗性 理想的质粒载体具有两种抗菌素抗性基因。 (3) 具有若干限制酶切单一位点（MCS） (4) 具有较小的分子量和较高的拷贝数 低分子量的质粒易于操作，克隆外源片段后仍能有效的转化给受体细胞，同时低分子量的质粒对限制酶具有多重识别位点的几率也较低；较高的拷贝数，可获得大量的克隆基因。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 以Ampr和Tetr为选择性标记，克隆位点在这两个选择性标记的单酶切位点上。选择AmprTets或AmpsTetr的重组子。 （4363bp） Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 3.质粒载体的选择记号 新陈代谢特性； 对大肠杆菌素E1的免疫性； 抗菌素抗性； 四环素抗性、氨苄青霉素抗性、 链霉素抗性、卡那霉素抗性 大多数质粒本身带有抗菌素基因； 抗菌素抗性记号便于操作、易于选择。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 二、质粒载体的选择标记 产生的蛋白质对细菌的膜修饰，阻止四环素进入菌内。 作用30S亚基，干扰蛋白合成。 四环素 产生的特殊酶，修饰链霉素。 作用30S亚基，导致mRNA错译。 链霉素 产生的氨基糖苷磷酸转移酶，修饰卡那霉素。 作用70S亚基，导致mRNA错读。 卡那霉素 产生乙酰转移酶，使氯霉素乙酰化失活。 作用50S亚基，干扰蛋白合成。 氯霉素 产生β-内酰胺酶，破坏β-内酰胺环。 干扰细菌胞壁的合成 氨苄青霉素 抗性机理 作用方式 抗菌素名称 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 4.不同类型的质粒载体 （1）高拷贝的质粒载体 克隆的目的是为分离大量的高纯度的克隆基因 （2）低拷贝的质粒载体 有些克隆的编码基因，其产物含量过高会严重的干扰寄主细胞的正常新陈代谢活动。 编码表面结构蛋白质的一些基因、调节细胞基础代谢活动的蛋白质编码基因以及囊纤维化跨膜传导调节蛋白质编码基因等。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. (3)失控