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RT-PCR技术 陕西中医学院医学科研实验中心 顾杰 1418755540@ 2013.7.1 背景简介 绝大多数疾病都是由若干基因表达改变所引起的。 基因的表达包括转录（DNA→RNA）和翻译（RNA → protein）两个阶段。 中医药所发挥的治疗与预防作用是直接或间接调整了基因的转录而实现的。 观察基因转录水平（mRNA）的变化，是中医药作用机制研究中的一个重要环节 RT-PCR技术，是中医药对单基因转录（mRNA）作用研究的过程中，使用的一种常用方法。 什么是RT-PCR? 对组织或细胞的总RNA进行抽提，把RNA反转录为cDNA，然后设计目的基因引物进行PCR，琼脂糖电泳并数码拍照，分析电泳条带灰度值，判断目的基因mRNA转录水平的相对量的变化。 如何做RT-PCR 一.抽提RNA（Trizol法） 步骤： 1．引颈处死小鼠，剖腹切取肝脏组织50mg（或106-107个细胞），加入1ml Trizol液，剪碎，快速充分匀浆。 2．22℃，静置5min。 3．加入氯仿0.2ml，颠倒15s。 4．22℃，静置3min。 5．离心：4℃×15000转/分×15min。(低温高速离心) 6．取上清液0.5ml。 7．加入0.5ml异丙醇，混匀。 8．22℃，静置10min。 9．离心：4℃×15000转/分×10min。 10．弃上液。 11．加入1ml