LncRNA文库制备SOP (Plant Seed Root)(ZG).pdf

LncRNA 文库制备SOP (Plant Seed/Root) I. 目的 本实验流程是 Illumina Cluster Station （或C-Bot ）和HiSeq 测序前期所用的 DNA 文库制备标准化操作流程（SOP ），作为构建插入片段为150-200bp 的RNA 配对末端测序文库的标准操作指南。 II. 适用范围 本标准操作规程适用于构建插入片段为150-200 bp 的DNA 配对末端测序文 库（PE 或PE index 测序文库），构建LncRNA 文库。本SOP 可去除植物种子及 根部样品的rRNA 。 III. 实验原理 利用Ribo-zero 试剂盒去除总RNA 中的rRNA ，经过片段化、合成一链和二 链cDNA，再通过末端修复、加A 、连接接头和User 酶消化及PCR 富集得到最 终的cDNA 文库。利用AMPure XP beads 选择目标片段并纯化。整个建库流程需 2 天。 Total RNA Total RNA样品检测 rRNA removal 5 rRNA-depleted RNA Fragmentation rRNA去除 Reverse transcription 5 片段化合双链cDNA + dUTP dATP dGTP dCTP Second strand cDNA synthesis 5 U U U 末端修复加A和接头 End repair, Add U-adaptor U U U U U 片段选择和PCR富集 USER Excision and PCR Library Enrichment 5 P7 文库质量检测 5