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37 1 () Vol.37 No.1
2011 年 2 月 Journal of Hunan Agricultural University (Natural Sciences) Feb .2011
DIO:10.324SP.J.1238.2011.00068
3 种亚群 PCV−2 感染性克隆的构建及体内外感染性
( 410128)
摘 要:PCR 2(PCV-2) 3(1A1B1C)DNA
pMD-18TPCV-23RP8(1A)P0(1B)P4-1(1C)3
Sac Ⅱl 767 bpPCV-2T43
PCV-1PK-155
(IFA)PCRPCV-231A1B1C
1A1B1C5PCV-2
DNA1A1B1CPCV-2DNA
关 键 词:2
中图分类号:S855.3 文献标志码:A 文章编号:1007− 1032(2011)01−0068−05
Construction of an infectious molecular clone of three kinds of subgroups
of PCV-2 and its in vitro and in vivo experimental infection
*
LI Wei, LUO Wei, YU Xing-long , LI Run-cheng , BAI Xia, GE Meng, WANG Ya, XIANG Wei-jun, LI Jing
(College of Veterinary Medicine, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China)
Abstract: The complete genome of three subgroups(1A, 1B, 1C) of porcine circovirus 2 (PCV-2)was amplified by
polymerase chain reaction(PCR) and cloned directly into plasmid pMD-18T, and recombinant plasmid carrying the
complete genome was constructed, designated RP8(1A), P0(1B), P4-1(1C) respectively. The three entire genomes of
PCV-2 were purified and recycled from recombinant pMD-18T with the digestion of Sac Ⅱ enzyme and then circular
genomic DNA were generated by self- ligating with T4 DNA ligase in vitro, resulting in three circular virus genome.
The PCV1-free PK-15 cells were transfected with the PCV-2 circular genome using lipofectin reagent. At the fifth
passages, PCV-2 virus and specific antigens could be detected by PCR and indirect immunofluorescent assay(IFA).Mice
were inoculated
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