正交设计优化裂褶菌液体发酵培养基的研究.docVIP

目 录 序言 1 1 材料和方法 2 1.1 材料 3 1.1.1 供试菌株 3 1.1.2 培养基 3 1.1.3 主要仪器设备 3 1.2 方法 3 1.2.1 菌种活化 3 1.2.2 菌种同步 3 1.2.3 单因素实验 3 1.2.4 正交试验 4 1.2.5 裂褶菌菌丝体的提取工艺流 4 1.2.6 裂褶菌菌丝生物量 5 2 结果与分析 5 2.1 裂褶菌菌丝生物量单因素结果与分析 5 2.1.1无机盐单因素实验结果与分析 5 2.1.2碳源氮源单因素实验结果与分析 6 3 小结与讨论 10 参考文献 10 致谢 11 正交优化裂褶菌发酵培养基研究 裂褶菌(Schizophyllum commune)属于真菌门、担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、裂褶菌科、裂褶菌属[1]。裂褶菌又名白参（云南）、树花（陕西）、鸡冠菌、鸡毛菌子等，是一种具有较高营养和药用价值的大型真菌。其担子果初为杯状，后呈盘状，菌褶窄，自基部辐射而生，有裂褶，单系菌丝，罕二系，孢子光滑，无色非淀粉质 [2]。其子实体可供药用，在云南的民间常用裂褶菌子实体与鸡蛋炖服，治疗妇女白带，效果非常显著[3]。 裂褶菌胞外多糖(Schizophyllan-glucan，SPG)，又称裂褶菌素，是一种水溶性的β-D-葡聚糖。具有一条由β-(1-3)键连接的β-D-吡喃型葡萄糖残基所构成的主链，并且在主链上每3个糖残基处有一个β- (1-6)连接的β-D-吡喃型葡萄糖侧链。 裂褶菌胞外多糖是一种特有的、稳定的、电中性的多糖。pH中性，蒽酮试剂反应呈蓝绿色，苯酚—硫酸试剂反应呈红色，α-苯酚试剂反应呈紫红色[4]。裂褶菌胞外多糖的水溶液具有触变性、假塑性和粘弹性。发酵的悬浮液，由于菌丝的网联可表现出非牛顿性的提高[5]。 裂褶菌胞外多糖在25℃时以三螺旋的形式溶解在水中，起源于三螺旋外侧的β-(1-6)连接的D-葡萄糖基团呈垂直状[6]。裂褶菌胞外多糖在水溶液中温度变化和构象转化具有极高的协同性；低温时，三螺旋结构有序，称为三螺旋I；高温时，三螺旋结构为无序，被称三螺旋П；而当水中的温度升至135~140℃时,链便从三螺旋结构上分离下来，完全分散成单链[7]。 多糖的生物活性与其结构、分支度和分子量有关。研究表明：在具有免疫调节能力的多糖中，只有那些具有β-(1-6)分支的β-(1-3) -D-葡聚糖才对肿瘤生长有抑制作用。而分支度(DB)在0.2~0.33的β-(1-3)-D-葡聚糖的生物活性则更强。裂褶菌胞外多糖恰为具有β-(1-6)-D-葡萄糖侧链的β-(1-3)-D-葡聚糖，它的分支度为0.33，分子量范围也在具有活性的范围之间，且可溶于水。因此，裂褶菌多糖较其它菌类、植物的β－葡聚糖有着更强的生理活性[8]裂褶菌胞外多糖在调节免疫功能、抗肿瘤、抗辐射等方面有着明显的疗效。在临床治疗上，作为免疫治疗剂可延长肺癌和胃癌病人的寿命[9]，是一种非常好的生物应答效应物(biological responsemodifiers，BRMs)。在日本，这种抗癌葡聚糖与其他化疗成分组合，目前正作为肿瘤免疫疗法的药物而使用，有着很好的疗效[10]。据日本小松信彦教授的药理实验表明:裂褶菌胞外多糖能提高细胞免疫功能，促进免疫球蛋白的形成，刺激单核吞噬细胞系统的活性，增强巨噬细胞的吞噬和消化功能，增进迟发性皮肤变态反应。它对荷癌鼠的巨噬细胞移动有抑制作用，对Sacoma-180，Sacoma-37，Ehrlish Carcinoma，Yoshida Sacoma等4种动物实验肿瘤有明显的抑制作用[9]。裂褶菌胞外多糖的另外一个特点是能与其他的抗生素联合使用，起到比两药各自单独使用有更高的疗效。它与链霉素、庆大霉素、利福平联合使用可提高抗菌素效价，降低抗菌素副作用的理想效果[10]。在对癌性胸膜炎的治疗过程中几乎全部患者在1~2月后胸水均有淋巴细胞及巨噬细胞出现，虽然胸水没有消失，但癌细胞变性、消失或明显减少[11]。国内北京医科大学的林志彬教授的药理实验表明，裂褶菌胞外多糖可恢复年老动物低下的细胞免疫及体液免疫功能，提高年老小鼠抗体形成细胞的数目，对延缓衰老有一定的意义[12]。 来源于裂褶菌的β-(1-6)支链β-(1-3)葡聚糖也可以帮助提高皮肤细胞的增殖，胶原质的生物生成，晒伤修复，并且可以有效地减少皮肤发炎，非常适合在化妆品和皮肤病学上应用。又因为它既是水溶性的，又是天然的，所以较目前化妆品中常用的从面包酵母中提取的不溶于水或以羟甲基磷酸化进行化学修饰的β－葡聚糖更适合应用于化妆品。裂褶菌胞外多糖作为一种抗衰老和抗发炎的有效成分有着广阔的前景[13]。 在国内，南京大学的李兆兰等人[14]在90年代对裂褶菌多糖的分离、提取、构象及其培养工艺进行过较为全面的研究，在对小鼠进