ConditionalReprogrammingcell(CRC)课案.pptxVIP

Conditional Reprogramming cell(CRC); ;一、CRC技术基本简介;2、定义 在体外细胞培养物中，通过添加rock 抑制剂（Y-27632)，和辐射处过的饲养层细胞（一般为成纤维细胞），在不改变基因型的情况下使已分化的细胞再次获得干细胞样特性，使细胞永生化，具有无限增殖功能，当条件去除时，干细胞重新转变成初始分化细胞，表现出专一性分化潜能。; Y-27632:丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶家族的小分子特异性抑制剂，作用：调节细胞骨架的重构，激活转录因子，促进细胞增殖。;2）饲养层细胞;二、CRC的制备操作;2、制备操作（子宫颈上皮细胞为例） 手术得到目标细胞； 细胞分离后，加入辐射处理过的鼠成纤维饲养 层细胞的F培养基中（含10μG Y-27632)； 细胞每3-4天进行传代，快速扩增； 胰蛋白酶消化处理，收集； 细胞纯化，去除饲养层细胞，获得较纯的目标细胞 传代：CRCs（4.2*10^5,T75培养瓶）与新鲜辐 射的成纤维饲养层细胞按1：10接种，培 养3 天；或CRCs（2.1*10^5,T75培养瓶） 与新鲜辐射的成纤 维饲养层细胞按1：20