单交换法构建鱼腥蓝细菌ftsZ的gfp原位标记菌株.pdf

第 35卷 第 6 期 华 中 农 业 大 学 学 报 V 〇1.3〇 No .6 2016年 11月 Journal of Huazhong Agricultural University Nov . 2016,30〜36 单交换法构建鱼腥蓝细菌 ftsZ 的 gfp 原位标记菌株 牛 天 彩 胡 胜 陈 雯 莉 王 莉 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，武 汉 430070 摘 要 利 用 单 交 换 法 将 整 合 到 鱼 腥 蓝 细 菌 PCC 7120基因组上，构 建 的 翻 译 融 合 菌 株 ，并观 察了 F tsZ 蛋白的亚细胞定位。结果表明：通过同源重组， 与基因组中唯一完整的/h Z 融合，既保证了 /^Z 基因的正常表达又能准确反映ftsZ 蛋白的亚细胞定位，并且实验周期短、操作方便，是研究蛋白质亚细胞定位的 一种简单有效的方法。 关 键 词 鱼 腥 蓝 细 菌 PCC 7120;单交换；FtsZ ; GFP 中图分类号 Q 93-31 文献标识码 A 文章编号 1000-2421(2016)06-0030-07 F ts Z 是参与细胞分裂的一个关键蛋白，在细胞 蛋白质定位的方法主要包括免疫荧光观察U5」以及 的中间位置聚合形成环状结构。1 9 8 0 年 Lutken- 荧光菌株的构建等[lfi-17]，其 中 G F P 原位标记菌株的 haus 等£11在大肠杆菌中发现该蛋f t ，并命名为FtsZ 构 建 是 目 前 使 用 的 最 直 观 方 便 的 方 法 在 鱼 腥 (.the . filarnenting t 苟.mperature-sensitive routant Z :)。 蓝细菌的蛋_ 质亚细胞定位相关研究中*根据鱼腥 研究发现，F tsZ 的同源蛋白几乎存在于所有的原核 蓝钿菌FCC 712Q _ g 姐特点 ，G F P融.雷株的构 生物中.包括古菌中的一些种类^。其三:维结构与 建主要利用复制型载体或整合型载体^\其中，利 真核生物中的微管蛋白类似•是一个高度保守的 用 整 合 型 载 体 可 以 将 整 合 到 染 色 体 或 者 蛋白\ 在细胞分裂过程中aF tsZ 通 过 水 解 G T P 在 细胞内的大质粒上。这 些 方 法 虽 然满 足 些 功 能 细 胞 的 中 间 位 董 聚 集 形 成 环 状 结 构 ，称为 基因的研究需要,但是也存在很多问题。复制型载 Z-ringD-s]。随着F ts Z 的聚会，Z-ring 募幽一 系列与 体的使用会导致目标基_ 的拷贝数不可控，从而导 细胞分裂相关的蛋白形成分裂复合体，从而启动细 致荧光堆积或者不足，以至于不能准确反映蛋白的 胞的分裂^11。 亚细胞定位和调控水乎6此外，■费基S 表达水平升 :鱼麗藍细菌 FIX { Anabd^na sp . strain 禽.，会.导致M 标蛋_白:大屬达进而可能影响貧株的 7120舞_多个细胞组成的産状蓝细菌，属乎 正 常 表 型 。而利用整合型质粒进行自标基因的 念珠*目念珠藻科念珠藻属| ]。在化合氮源贫瘠 的条件下，每 1()〜20个营养细胞就会分化一个具有 g/ p 标记，通常需要通过基国的双：=交换来完成，这