褐藻酸降解菌A7的发酵及产酶条件研究.pdf

圃 N 褐藻酸降解菌 A7的发酵及产酶条件研究 褚洪蕊，唐景春 (环境污染过程与基准教育部重点实验室 ，南开大学 环境科学与工程学院 ，天津 300071) 摘要：以海藻废弃物堆肥 中分离到的薄壁杆菌属 (Grnczz czz )的褐藻酸降解茵A7为研究对象，对该菌 的生长及产酶条件进行 了研究。结果表明，该菌的最适产酶条件为：温度 30~C，海藻酸钠 的质量分数o．5 ， pH9．5，NaC1浓度 0．5mol／L，以蛋 白胨 为主要 氮源 。在 最佳 条件 下培养 96h达到 最 高酶 活 力 12．79U／mL。 关键词 ：褐藻酸降解茵；褐藻酸裂解酶 ；产酶条件 ；薄壁杆菌属 (Gracillibacillus) 中图分类号 ：Q93．3 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—3096(2008)11~0093—04 褐藻酸是由 D一甘露糖醛酸和a—L一古罗糖醛酸 1．3 菌株生长 曲线的测定 通过 1，4糖苷键连接形成 的线形 阴离子多糖口]。 对菌株进行活化 ，接入装有 30mL种子培养基 其来源广泛，是海带、马尾藻、巨藻等褐藻的主要组 的 100mL三角瓶 中，于 30℃下 160r／min培养 ，每 分 。褐藻多糖以其价格低廉且降解产物褐藻寡糖生 隔24h取样 ，于 650nm处测定生物量，以吸光度值 物活性较强 ，被广泛应用于食 品、化工 、医药等行业 ， 对时间做 出细菌 的生长 曲线图。 越来越受到研究者的重视_2]。 1．4 发酵产酶培养实验 褐藻酸裂解酶通过 消去机制切割 一1，4糖苷 每组实验均在 100mL三角瓶中装入 30mL发 键 ，并在非还原末端产生 C．不饱和双键 ，产生某些 酵培养基 ，按 2 (体积分数)接种量接入活化后 的菌 具有特定生物活性 的寡糖_3]。其酶解反应条件易于 液 ，于 3O℃下 160r／rain培养 72h后 ，取发酵液测定 控制、底物特异性高 ，在寡糖制备 的各个方面明显优 生物量 。将 发酵液 于 4℃，8000r／rain下 离 心 15min，取上清液 (粗酶提液)测定酶活力 。每组设 3 于化学和物理降解法 ，因此褐藻酸裂解酶成为当前 个平行样 。 研究的热点。在 已报道 的文献 中，褐藻酸裂解酶要 1．5 酶 活力的测定 方法 来源于海洋藻类_4]、海洋软体动物_5体 内和多种微 参照纤维素酶的测定方法_9]：取 1mL酶液加入 生物(包括海洋细菌[6]、土壤细菌_7和真菌 )，为假 到盛有 1mL0．5 褐藻酸钠 (用 PH7．0的磷酸盐缓 单胞菌、别单胞菌、弧菌、固氮菌、芽孢杆 菌等菌 冲液配置)底物 的试管 中混匀 ，40℃水浴 中反应 属[3]。作者以海藻废弃物堆肥中分离 出的具有海藻 20min后 ，迅速于沸水浴 15rain除去酶活 ，然后加入 酸降解功能的薄壁杆菌属菌株 A7为研究对象，对其 3mLDNS溶液 ，沸水浴反应 5min，迅速冷却 ，定容 生长及产褐藻酸裂解酶的条件进行初步探索，为其 至 25mL，于540nm下测定吸光度 。空 白管由1mL 进一步研究和应用提供参考依据 。