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制药工艺综合实验报告 （发酵及纯化部分） 组 别：第二组 组员姓名：姚玉婷、俞岚、苏 畅、付悦、周雯、范秋玥 班 级：制药 1001 学 院：药学院 指导老师：张旦旦、蔡燕飞 实验一 工程菌的自动罐上发酵 【实验目的】 1. 熟悉微生物培养基配置和常规的灭菌 2. 掌握基本的工程菌在发酵管上的生长规律 3. 掌握工程菌发酵工艺控制 4. 熟悉发酵设备及其相应的控制系统 5. 掌握 SDS －PAGE 监测重组蛋白表达 【实验器材】 1. 菌株：工程菌 E.coli HB101/pJJ-rhIFNα2B 2. 仪器：天平、pH 计、磁力搅拌器、灭菌锅、超净工作台、、接种环、酒 精灯、5L 发酵罐、摇床、台式高速离心机、移液枪等。 3. 玻璃器材：烧杯 500ml、250mL、50ml 各一个，量筒 1L、500mL、100mL 各一个，250mL 三角瓶×4 ，Ep 管，量杯 1L、2L 各一个。 4. 试剂：Typtone 、Yeast Extract 、NaCl、NaOH、MgCl 、NH Cl 等 2 4 5. 培养基配方： (1) LB 种子培养基(g/L)：Typtone 10，Yeast Extract 5，NaCl 10，调 pH7.0，使 用前加 Amp 至 100μg/ml。 (2) 发酵培养基(g/L)：Typtone 10，Yeast Extract 30，KH PO 1，K HPO ·3H O 2 4 2 4 2 5.2，NH Cl 1，K SO 2.6，TESM 10ml ，使用前加 Amp 至 100μg/ml。（注 4 2 4 意： TESM 装于三角瓶中，单独灭菌） (3) TE(1L) ：0.1 mol/LTris ，0.05mol/L EDTA，pH7.5 【实验步骤及结果记录】 1. 培养基配置： (1) LB 种子培养基：30mL/250ml 三角瓶，2 瓶； (2) 配制发酵培养基 3L：称取 Typtone 30g ，Yeast Extract 90g ，KH PO 3 g ， 2 4 K HPO ·3H O 15.6g ，NH Cl 3g ，K SO 7.8g ， 加去离子水搅拌溶解后，用去离 2 4 2 4 2 4 子水定容至 3L，倒入发酵罐。 (3) 分装 30ml TESM 于 250ml 三角瓶，接种前加入发酵罐中。 (4) 配置 200ml 30%磷酸，100ml 2M NaOH，100ml 20%消泡剂盛于流加瓶中。 (5) 将上述培养基、溶剂、200μl 枪头于 121℃高压蒸汽灭菌 20min。 2. 氨苄青霉素(AMP)母液 100mg/ml，已配置 (1) 称取氨苄青霉素 2g，溶于 20mL 水中 (2) 用 0.22μm 微孔滤膜过滤除菌，分装于 1.5mLEp 管中，冻于－20℃备用。 3. 种子制备 ： (1) 取 30mL LB/250ml 三角瓶，加入 30μl Amp 母液。 (2) 用接种环从平板保存的 HB101/rhIFNα2B 划取一环菌，浸没于培养基中并 划动接种环