液相色谱柱使用疑难问题解析.PDFVIP

苏州市莱顿科学仪器有限公司 TEL ：0512 FAX ：0512 液相色谱柱使用疑难问题解析 内容提纲： 一、 液相色谱柱的安装、启用和维护中的重点注意事项 1、柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配 2、溶剂的匹配转换 3、新柱使用前的平衡和老化 4、pH使用范围 5、色谱柱的保存 二、柱压问题 1、填料破碎和使用后，有填料粉末生成 2、颗粒物堵塞引起柱压上升和对策 1）预防措施 2）故障排除 3、化学污染物引起柱压上升和对策 1）预防措施 2）故障排除 三、峰形问题 1、峰后拖 2、峰前延 3、其他峰形问题 四、保留时间问题 1、 保留时间的重现性 2、 保留时间漂移 3、 柱与柱之间的重现性 4、 批与批之间的重现性 五、寿命问题 六、其他疑难的色谱技术问题 一.安装、启用和维护中重点注意事项 色谱柱既是液相色谱仪的最核心部件，价格相对昂贵，请牢记它是高档仪器中的高档部件，给它以足够的尊重 和关怀。如避免强烈的碰撞和震动，尽管色谱柱从1米高的实验台掉落到水泥地上不至于100%会损坏，但50%的可 能损坏你也承受不起。另外不要让柱床变干，避免在严寒环境受冻等。 1. 柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配 第 1 页 共 14 页 苏州市莱顿科学仪器有限公司 TEL ：0512 FAX ：0512 色谱柱是消耗品，不是仪器原配的情况很多。上图表明柱连接的6种不同方式（数字单位是英寸），如果两者 类型不匹配将会产生漏液或者死体积过大的现象。接头比柱头深度长，不易拧紧而漏液；接头比柱头深度短，柱头 内留有空隙而产生死体积，使谱带展宽和峰拖尾。 2. 溶剂的匹配转换 色谱柱内保存溶剂和仪器系统内存留溶剂，如果和流动相不匹配，使用前需进行转换。特别是流动相含缓冲盐 时，如保存溶剂是纯有机相或有机相比例高，直接将新柱接入使用，会导致缓冲盐在柱内结晶析出，最严重会将新 柱永久不可逆地损坏。正相柱保存溶剂一般为正己烷，如果要转换成HILIC柱模式使用，由于正己烷和甲醇乙腈的 互溶性不好，转换中间需用二氯甲烷或乙酸乙酯过渡。 3. 新柱使用前的平衡和老化 厂家出厂检验时一般都已进行过平衡，但色谱柱到最终用户时间不一，用户正式测定前最好对色谱柱再次平衡。 最好的平衡兼老化一起进行的方法是运行几次完整的分析程序（包括进样），直到观察到峰形、保留时间和峰面积 稳定为止。所谓“老化”是借用了气相的术语，目的是达到分析物在色谱柱以及整个液相系统流路中的吸附饱和。 对某些特定的待测物，如分子量大于1000 的，因扩散速度慢，老化时间相应要长，可采取大浓度进样或在同一个洗 脱周期内连续进样多针的方式加快老化。 4. pH 使用范围 一般认为硅胶基质柱子的pH使用范围是2-8，这是很粗略的。硅胶类型、使用温度、硅胶表面所键合的固定相 类型以及缓冲盐的不同，对此均有影响。硅胶比孔容小、键合密度大的填料pH耐受范围要大一些，如月旭公司的 Ultimate XB-C18色谱柱，选用的是高品质硅胶，加上高密度键合和双封尾，使pH耐受范围最大提高到10。磷酸盐 缓冲盐渗透力强，有加快硅胶溶解的副作用，它的存在会降低pH使用范围。有机杂化硅胶以及硅胶表面涂覆杂化层 的硅胶填料，有机质的存在使pH使用范围能到12以上，月旭公司的Xtimate系列产品即属此类。 5. 色谱柱保存 短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流动相（不含缓冲盐）保存为佳，以尽量减少下次使用的平衡时间。一般只 建议在长期保存反相柱的时候用纯甲醇或乙腈，一方面纯有机相保存有最大限度减少键合相水解的作用，但纯甲醇 （乙腈）又会将已水解而暂时吸附在柱内的键合相洗脱出去，使固定相流失进程加快，寿命缩短。纯有机相保存还 有易挥发使柱床变干的缺点，使用80%左右有机相保存也属好的选择，且足以避免长菌。强烈建议在柱身上