高纯度~125)I-蛇毒神经生长因子的制备.pdfVIP

第 11 卷 第 3 期 . 11　 . 3 同　位　素 V o l N o 1998 年 8 月 Journal of Iso topes A ug. 1998 高纯度125 I蛇毒神经生长因子的制备 刘秀文　汤仲明　柴彪新 (军事医学科学院放射医学研究所, 北京 100850) 汪家政 (军事医学科学院基础医学研究所, 北京 100850) 介绍了125 蛇毒神经生长因子( ) 的制备及鉴定。标记前纯品在 磺酸型阳离子交 I N GF W aters SP 换高效液相 (H P IEC ) 中表现为单一峰, 但125 I 标记后 Sephacry1 S200HR 凝胶标记蛋白部分的 H P IEC 谱, 除125 I蛇毒N GF 外, 出现了分子量较大、与凝胶柱不结合的未知组分, 提示可能发生聚合 和表面电荷变化。结合蛇毒 性质选用 阳离子交换柱去除上述未知组分。放化纯度 N GF Sepharo se SP 和生物鉴定证明: 两步纯化标记产物得到了放化纯度为 97% 、有生物活性的125 I蛇毒N GF 。提示根据 多肽特点选择纯化和鉴定方法是制备高纯度有活性标记多肽的重要环节。 关键词　蛇毒神经生长因子　125 I 标记　纯化　生物活性检定 中图法分类号　 817 R ( ) 蛇毒神经生长因子 蛇毒N GF 是一种由中华眼镜蛇毒提取的碱性蛋白, 相对分子量 13 kD , 等电点pH 9—10。大鼠药效学研究表明, 蛇毒N GF 能明显促进受损周围神经运动和感觉 [ 1 ] 125 功能的恢复 。为了对蛇毒N GF 进行动物药代动力学研究, 需要制备高纯度 I蛇毒N GF 。以 往文献报道125 I 标记蛋白质后多用 Sephadex G25 脱碘, 该法不能去除高分子量杂多肽和蛋 白, 不能满足药代动力学研究所需的纯度和生物活性。曾采用高分辨 Sephacryl S200HR 分离 [ 2 ] 纯化 , 但蛇毒N GF 的研究表明, 该方法也不能达到要求, 必须根据多肽特点选择纯化和鉴定 方法, 才能制备出高纯度有生物活性的125 。 I N GF 1　材料和方法 11　试剂和仪器 蛇毒N GF : 大连司威特制药有限公司提供, 批号 960328, 冻干粉, 纯度 98% , 比活度 100 。用前溶于含 02 的 001 5. 4 乙酸缓冲液中, 浓度 3 。 kU g m o l L N aC l m o l L pH g L : 军事医学科学院毒物药物研究所提供。 125 : 公司生产, 批号 716 , 放化 Iodogen