微生物学 实验5 霉菌的形态观察.pptVIP

实验五 霉菌的形态观察 一、实验目的 (1)观察霉菌的菌落特征。 (2)观察根霉、青霉、曲霉的形态构造及无性孢子。 (3)学习并掌握霉菌的制片方法。 二、实验原理 霉菌为真核微生物，菌丝较粗大，有分枝或不分枝的。菌丝体为无色透明或暗褐色至黑色，或呈现鲜艳的颜色。在显微镜下观察时，菌丝皆呈管状。在固体培养基上生长，为绒毛状或棉絮状。一些较高等的霉菌丝状管道中皆有横隔，将菌丝隔成许多细胞。霉菌细胞易收缩变形，而且孢子很容易分散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉兰染色液。该染色液①可使细胞不变形；②具有防腐杀菌作用；④不易干燥，能保持较长时间；⑤溶液本身呈蓝色，有一定的染色效果。 此外，为了得到清晰、完整并保持自然状态的霉菌形态，还可以利用载玻片培养法或玻璃纸透析培养法进行观察。载玻片培养法是在一定湿度的培养皿中，放人一霉菌载片培养物，并盖上一块盖玻片，使霉菌在一狭窄的空隙中生长、繁殖便于在显微镜下观察霉菌的特殊形态构造，如曲霉的足细胞、分生孢子、顶囊等生长情况。并且还可在同一标本上观察到它们不同阶段的生长、发育状况。玻璃纸透析培养法是利用玻璃纸的半透膜特性及透光性，将霉菌生长在覆盖于琼脂培养基表面的玻璃纸上，然后将长菌的玻璃之间取一小片，贴放在载玻片上，置于显微镜下观察。本实验以制片观察为主。 三、实验材料 1.菌种 黑曲霉、青霉、黑根霉。 2. 其他 显微镜、培养箱、养皿、乳酸石炭酸棉蓝染色液、载玻片、盖玻片、无菌水、接种环、接种钩、解剖针、酒精灯、火柴、滤纸、玻璃铅笔等。 四、操作方法 (一)制片观察法（水浸片法制作标本片） (1)在一洁净载玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉兰染色液；按无菌操作，用解剖针挑取少量带有孢子的霉菌菌丝于染色液中（注：挑取带有颜色的菌丝），再细心地把菌丝挑散开，然后用盖玻片盖上（注：不要产生气泡）。 (2)置于显微镜下，观察霉菌菌丝的形态（观察菌丝有无隔膜、假根、匍匐枝、足细胞；以及无性或有性孢子的形态、大小和颜色等）。 (二)玻璃纸透析培养观察法 (1)向霉菌斜面试管中加入5ml无菌水洗下孢子，制成孢子悬液； (2)用无菌镊子将已灭菌的直径与培养皿相同的圆形玻璃纸覆盖在察氏培养基平板上； (3)用1ml的无菌移液管吸取0.2ml孢子悬液于上述玻璃纸平板上，并用无菌玻璃棒涂抹均匀； (4)置于28℃培养箱内培养48h后，取出培养皿。打开皿盖，用镊子将玻璃纸与培养基分开，再用剪刀取一小片，置于载玻片上，用显微镜观察其特殊形态。 根霉 黑根霉（匍枝根霉） 菌落：初期白色，老熟后灰褐色 假根 匍匐枝 孢子囊 接合孢子 显微形态：菌丝体无隔，有假根和匍匐枝，其中，匍匐枝无色，假根发达呈褐色。孢子囊簇生呈黑色或褐色，可形成球状接合孢子。 孢囊孢子 接合孢子 曲霉 黑曲霉 菌丝体心态：有横隔，常无色，老熟 时变为浅黄色至褐色，有足细胞 无性生殖体： 分生孢子梗、顶囊、小梗、分生孢子 足细胞 分生孢子 有隔菌丝 小梗 顶囊 分生孢子梗 分生孢子头发辫状 黑曲霉的显微形态 青霉 菌丝体形态： 营养菌丝有横隔，无足细胞 分生孢子梗有横隔 分生孢子头无顶囊，呈帚状 小梗顶串生分生孢子（球形 、椭圆或短圆柱状） 电子显微镜2400倍 青霉的显微形态 五、实验作业 将显微镜下所观察到的3种霉菌的菌丝体形态结构及产孢结构描绘出来，并标注各部分名称。 * *