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核酶(ribozyme)应用的理论基础 祁国荣 (中国科学院上海生命科掌研究院生物化学与细胞生舒学研究所，200031) 概况 与由蛋白质构成的酶完全是不同的。但是，核酶与酶具有根相似的催化特性。 核酶发现于上世纪80年代初，至今已有20年了。主要发现者和研究者美国的ZCceh和 具有催化活性的RNA定名为‘核酶’以来。迄今发表文献有2700篇，其中综述约400篇． 90年代以来，我国也有许多关于核酶、尤其是核酶的应用研究工作。 发现 活性，它能自动切除内含予本身，并连接外显予得到成熟的rRNA。这是一种倦化分子内的自 和Pace两个实验室合作发现，一种加工酶聃8SeP(由蛋白质和RNA组成的复合物，催化切除 tRNA前体的5’端冗长序列．故也叫tRNA5’一威熟尊孽)中的科A(绝对不舍蛋白质)，在特定条 件下，具有与肫seP全酶相同的催化活性，即单独RNase 年～1996年澳大利亚Symons实验室在研究拟病毒等的复制机制时发现，通过滚环复制生成复 制单体是自动进行的．因为它们具有能催化自我剪切(self—cleavage)的‘锤头结构’。 分类 有不同的分类方式．如按上述发现分类，可分为：自我剪接(内含子)核酶、自我剪切核 酶和蛋白质／RNA复合物核酶．大概已分离到的或人工制造的核酶，都可以归入这三大类中。 如按与6大类酵相对比分类，除‘氧化还原酶’外，对应于其它5大类酶的拨酶都已在自然 界找到或试管中得到。已知大部分核酶催化水解反应，可称之为‘水解核酶’．这类棱酶的底 物大都是RN^’即RNA作用于RN^． 应用 21 目前．核酶应甩的理论基础是核酶的专一的‘剪切活性’和‘剪接活性’。利用其专～破 坏RKA尤其是mRNA的特性．以阻断有害基因表达和病毒RNA复制．达到治疗疾病的目的。从 核酶的剪接活性人们也已设计出方案以修复变异RNA． (1)棱酶的剪切活性利用核酶定点剪切RNA分子的特性，设计核酶进行抗病毒、抗肿 瘤和针对某些疾病的研究，取得了不少进展．这类核酶有：锤头状核酶、发夹状核酶、RDV 棱酶、RNazeP-RNA核酶、RNa∞P本身等等。 有害mRNA、病毒RNA： 按酶定点剪切 针对乙肝病毒(m3v)和丙肝病毒(Hcv)的核酶治疗进入了预临床，而针对人免疫缺损病毒 Onv)的核酶治疗正在进行I期，Ⅱ期临床试验。除了髓v、HCV和HIV外，核酶抗病毒研究 角体病毒㈣等等．理论上所有病毒，RNA病毒和DNA病毒，都能设计核酶进行抑制实验。 有大量用核酶抑制肿瘤的报道。在了解某种肿瘤发病的分子机制的基础上，可针对性设 棱酶)．抗维甲酸早幼粒细胞白血病(抗PILfL／RARd核酶)，前列腺癌(抗bcl-2核酶)，肺癌(抗 突变筇3mRNA棱酶、抗突变k-ras拨酶、抗血管内皮生长困子VEGF棱酶、抗转谷氨酰胺酶 2核酶)，臃癌(抗突变k-ras核簿)．雌激素受体阳性的乳腺癌(抗腑胁核酶)，神经胶质瘤(抗 蛋白激群Ca或血管内皮生长因子棱酶)．人的成胶质细胞瘤(抗肝细胞生长园子It-met核酶)， 卵巢瘤(抗C-tⅫW核醇)，等．针对端粒醇(蚓om觚∞)设计豹棱酶，可抑制多种肿瘤，如黑藁瘤、 子宫内腆瘤等。用棱酶珥断多药抗性基因㈣)表达，从而可减弱肿瘤(如白血病)对化疗药物 的抗药性． 针对特定m眺靶分子进行核酶治疗舶疾病有：心血管疾病(抗简一B核酶)，动脉粥样硬 皮癣等． 针对某些遗传疾病的核酶治疗研究，展示了核酶应用的广阔前景。许多显性遗传病是由 impt商珧)’，原纤蛋白 于基因突变引起的．如I型胶原基因突变引起‘成骨不全(omeogenesis 基因(YBNJ)突变造成Ma而m综合征。设计核酶分别定点剪切突变I型胶原mRNA和突变原纤 蛋白mR．NA，而不影响正常的相应nLRNA．对缓解这些遗传病症有效。 f2)核尊的剪接活性利用核酶的‘自我剪接活性’设计“反式剪接”或“分子间剪接” 拔酶，可以对突变的nⅡR．NA分子在RNA水平上进行修复，使之转变成为具有正常功能的 m．RNA。目前用于修复RNA的核酶主要是I型内含子核酶。l型核酶催化‘分子内剪接’．即 splice)’或‘分子问剪接’。如下图：