化学发光法检测传染病整理ppt.ppt

3、包涵体抗原，抗原性弱 4、缺乏构像表位 5、原核表达分子量小，抗原表位有限 6、抗原非糖基化，稳定性差 7、信号放大能力有限 8、固相载体形成的空间位阻 问题形成的技术原因---阳性标本的漏检 威高新型丙肝化学发光试剂的关键技术 1、包被和标记实现双特异，以降低假阳性率，并提高分析敏感度。 2、通过整体系统优化，进一步扩大阴阳反差，使结果判读泾渭分明。 威高新型丙肝化学发光试剂技术策略---灰区的解决 1、酵母真核表达抗原，高效减少灰区标本 eg: E.coli与Pichia pastoris 检测国标 国标品 表达载体 N2 N4 N24 P1 P5 P21 大肠杆菌 （原核表达） 0.260 0.149 0.235 0.742 2.659 0.706 毕赫酵母 （真核表达） 0.060 0.014 0.017 1.736 2.833 1.619 Anti HCV重组 NS3 抗原 NS3 HCV病毒的最重要的抗原 通过酵母真核系统成功的表达NS3抗原, 多重折叠以达到高度的免疫活性 高纯度; 易于直接标记 2、针对Fab端的单特异性抗体标记物一般二抗和单特异抗体的对比 国标 二抗类型 P27 L3 N2 N4 N18 N24 L4 一般单抗 0.560 0.160 0.230 0.162 0.071 0.214 0.065 单特异抗体 0.892 0.321 0.065 0.043 0.014 0.102 0.009 3、板式固相载体升级为管式磁微粒子包被 ★ 包被量更富足 ★ 管式液相反应更充分 ★ 更有效的解决空间位阻效应 4、光信号检测，提高信噪比 信号放大代替靶标放大，减少靶标放大带来的非特异性反应，远远大于ELISA的信噪比。 新型丙肝化学发光试剂---降低漏检率 1、在CORE、NS3、NS4、NS5的基础上增加了E1区，保证抗原片段的齐全 2、pichia pastoris表达系统带来以下优势 （1）非包涵体而可溶性表达，抗原性强 （2）因糖基化而提高稳定性 （3）分子量大，抗原表位丰富 （4）具有构像抗原表位，而提高检出率 3、磁微粒子标记抗原增加抗原抗体的反应强度 新型丙肝化学发光试剂检测国家参考品符合率对比 方法学 阳性符合率 阴性符合率 最低减出限 ELISA 30/30 29/30 3/4 CLIA 30/30 30/30 3/4 新型双特异丙肝化学发光诊断试剂临床验证报告 方法学 真阳性检出率 假阳性率 酶免试剂 146/150 19/2000 新型双特异 150/150 3/2000 丙肝化学发光试剂临床对比试验报告 对照试剂：雅培I2000SR 试验单位：包头市中心医院 雅 培 总计 阳性 阴性 威 高 阳性 4 0 4 阴性 1 13 14 总计 5 13 18 NO。 雅培 CUTOFF = 18000 威高 CUTOFF = 5040 RLU s∕co RLU s∕co 1 720 0.04 1597 0.317 2 2520 0.14 2072 0.411 3 1800 0.1 1749 0.347 4 1260 0.07 1723 0.342 5 1440 0.08 1875 0.372 6 1800 0.10 1879 0.373 7 2160 0.12 2313 0.459 8 540 0.03 1512 0.300 9 900 0.05 1617 0.321 10 720 0.04 1602 0.318 11 1080 0.06 1839 0.365 12 540 0.03 1522 0.302 13 720 0.04 1617 0.321 14 34020 1.89 3941 0.782 15 226440 12.58 222006 44.049 16 34020 1.89 226548 44.95 17 226440 12.58 54886 10.89 18 138240 7.68 118238 23.46 RIBA试验结果：阴性。 定性检测项目结果判读-有反应性和无反应性 定性项目一般以阴阳性作为结果判断的基础。 阴阳性判读基于量化的结果，主观进行阴阳性的定义。 真正的确认的阴阳性需要通过金标准测量方法才能确证。