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残留溶剂GC检查方法的设计与验证 －毛细管检查方法 高青 北京市药品检验所 一、检测器 二、溶媒 三、供试品溶液的配制 四、顶空瓶中样品体积 五、色谱柱 六、温度 七、进样方式 八、提高灵敏度 九、提高分离度 十、未知峰归属 十一、方法验证 一、检测器 FID（火焰电离）、 NPD（热表面电离）和ECD（化学电离） ，应用范围分别为有机物、氮/磷化合物、电负性物质（卤代烃）。 多数情况下，三氯甲烷、DMF、DMSO均用FID检测，但需采取一些措施提高检测灵敏度。 四氯化碳则必须用ECD检测器。 以下三点注意： FID－质量型检测器，对有机物均有响应，只是对难电离的卤代烃和氮/磷化合物灵敏度比ECD、NPD检测器低很多。 ECD－半选择性的检测器，对多种类型化合物均有响应。如果含有其他非卤代烃溶剂，应进行系统适用性试验考察分离度。＊＊ 如果采用FID检测器，同时又采用填充柱测定三氯甲烷，灵敏度达不到限度要求。＊ 二、溶媒 选择原则：溶解样品，并对色谱柱无损坏 例如直接进样不能含GC不能分析的无机盐 顶空进样： 首选水，其次DMF、DMSO、不挥发酸碱溶液，不可使用盐酸溶液和氨水，可选择在80～90°C加热能溶解样品的试剂。温度太高爆瓶 如待查成分为苯、甲苯、三氯甲烷等水溶性不好的溶剂，可采用混合液，即先用少量乙醇或甲醇溶解待查溶剂再用水稀释。 当待测溶剂在有机相中的分配系数明显大于水相（例如三氯甲烷），对顶空进样来说采用有机相如DMF为溶剂不是很好的选择（K大，灵敏度低）；如果样品也只能在有机相中溶解，建议采用混合液。 直接进样： 水、合适的有机溶媒或混合液。对于非极性色谱柱，水对柱有影响，会缩短柱的使用寿命。 助溶方式： 有报道加5%SDS助溶。 顶空小平加盖后可超声加热助溶 三、供试品溶液的配制 不可超声或加热助溶＊ ，以免残留溶剂挥发；如果顶空进样，样品置顶空瓶封盖之后可以超声或加热溶解。 大颗粒样品不可以研磨取样，只能取原态样品（或冷冻粉碎）。 顶空进样方式要求对照品配制与供试品配制方法应绝对一致，否则顶空瓶中气液平衡状态有差异（基质效应）。 对照品配制最好采用标准加入法。 四、顶空瓶中样品体积 顶空样品瓶中的样品体积（Vs）对分析结果影响很大，因为它直接决定了相比β。 　Cg＝Co/（K＋β）其中β＝Vg/Vs，K＝Cs/Cg，当Kβ时，样品体积改变对灵敏度影响很小。 当Kβ时，影响很大。 　例如，分析水中的二氧六环和环己烷（三氯甲烷），60oC平衡，两者的K分别为642、0.04。当样品体积由1ml增加至5ml，二氧六环的峰面积只提高了1.3％，而环己烷却提高了452％。根据实际经验来说，20ml顶空瓶样品装量为5ml比较适当。 五、色谱柱 残留溶剂检查大多需要较高的分离度和检测灵敏度，通常采用毛细管色谱柱。填充柱口径大，造成溶剂峰扩散，检测灵敏度低＊。 实践证明，使用非极性至中等极性色谱柱，配合适当柱温梯度可分离大部分有机溶剂。通常当待查溶剂数目仅两、三种时，可用极性较强的色谱柱，出峰快，分析时间短；当溶剂数目较多时，还是优选非极性至中等极性柱分离较好。 六、温度 色谱柱：初温应接近样品中最轻组分的沸点，而终温则取决于最重组分的沸点，升温速率则要依样品的复杂程度。 进样口：一般接近沸点最高的组分，但要低于易分解组分的分解温度。常用的条件是250oC。 检测器：原则是避免流出色谱柱的组分冷凝。FID检测器通常设置为300oC。 顶空瓶平衡温度：温度越高，蒸汽压越高，顶空气体的浓度越高，分析灵敏度越高。待测组分的沸点越低，对温度越敏感。但温度的改变只影响分配系数K，并不影响相比β。 　　　例如水溶液中的甲醇、甲乙酮、甲苯、正己烷和四氯乙烯，80oC平衡温度与40oC平衡温度相比，甲醇在顶空气体中的浓度增加5.15倍，甲乙酮浓度增加2.61倍，甲苯只增加25%，而正己烷和四氯乙烯，分别增加2.6%和10.4%。 　　　实际工作中往往是在满足灵敏度的条件下，选择较低的平衡温度。过高的温度可能导致某些组分的分解和氧化。一般采用高沸点溶剂时，样品比较稳定的情况下，推荐80oC左右的平衡温度。 七、进样方式 作为残留溶剂检查，顶空进样有许多优越性，不需要对样品进行特殊处理，不用担心样品中不挥发组分对GC分析的影响。直接进样对仪器要求低，由于部分实验室不具备顶空进样器，该方法的应用也具普遍性。 进样方式选择需注意的几点： 对于待测溶剂在溶解样品的溶剂中溶解度小（分配系数小）的情况下，例如三氯甲烷在水溶液中，采用顶空进样方式测得的灵敏度将大于直接进样；反之，例如甲醇与水互溶性好，直接进样的灵敏度将大于顶空进样。 测定二氯甲烷、三氯甲烷等卤代烃时，如果溶剂为水，直接进样容易造成FID检测器灭火，此时