2016新课标创新人教生物选修1专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.docVIP

一、研究思路筛选菌株微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)同时抑制或阻止其他微生物的生长该类培养基是选择培养基。统计菌落数目(1)统计菌落数目的常用方法：稀释涂布平板法。(2)统计依据：当样品的稀释度足够高时培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数能推测出样品中大约含多少活菌。设置对照：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响提高实验结果的可信度。二、实验设计操作步骤：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察。土壤取样一般要铲去表层土因为绝大多数细菌分布于距地表约 3～8_cm的土壤层。样品的稀释：不同的微生物需要稀释的倍数不同请填写下表 微生物 细菌 放线菌 真菌 稀释倍数 104、10、10、10、10、10、10微生物的培养与观察微生物的生长受温度的影响菌落的数目和特征是观察的主要内容。三、操作提示无菌操作：取土样用的小铁铲和盛土样的信封都要进行灭菌。称取土样要在火焰旁进行。稀释样品要在火焰旁操作。做标记：对平板和试管进行标记尤其进行系列稀释时要按照稀释度递增的顺序将试管排列成行。四、课题延伸分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成氨使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌若指示剂变红可确定该种细菌能够分解尿素。 [共研探究]自然界中目的菌株的筛选如图是美国黄石国家公园的一个热泉从耐热细菌中分离到耐高温的聚合酶。 (1)实例：DNA多聚酶链式反应(PCR)是一种在体外将少量DNA大量复制的技术此项技术要求使用耐高温(93 ℃左右)的DNA聚合酶。(2)Taq细菌能从热泉中被筛选出来的原因：热泉温度70～80 ℃淘汰了绝大多数微生物而使耐热的细菌被筛选出来。(3)自然界中目的菌株的筛选依据：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求到相应的环境中去寻找实验室中目的菌株的筛选(1)原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)同时抑制或阻止其他微生物的生长。(2)方法：利用选择培养基分离。(3)选择培养基概念：允许特定种类的微生物生长同时阻止或抑制其他种类微生物生长的培养基。下面是本课题使用的培养基的配方请分析：0.2 g 葡萄糖 10.0 g尿素 1.0 g琼脂 15.0 g 将上述物质溶解后用蒸馏水定容到1 000 mLa.由于加入了凝固剂琼脂从物理性质看此培养基属于固体培养基从功能上看属于选择培养基。在该培养基的配方中碳源是葡萄糖氮源是尿素。绝大多数微生物都能利用葡萄糖只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。以尿素为唯一氮源的培养基可以分离得到产生脲酶的微生物(即分解尿素的微生物)。统计菌落数目常用来统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法。(1)统计菌落数目稀释：当样品的稀释度足够高时培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。计数：一般选择菌落数在 30～300的平板进行计数。统计：通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中大约含有多少活菌。为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中经涂布培养计算出菌落平均数。(2)活菌数的计算方法(公式)：每克样品中的菌株数＝()×M，C表示：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；表示：涂布平板时所用的稀释液的体积；表示稀释倍数。设置对照(1)设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响提高实验结果的可信度。(2)设置对照的方法：①空白对照：不给对照组任何处理因素；②条件对照：给对照组施以部分实验因素但不是所要研究的处理因素；③自身对照：对照组和实验组都在同一研究对象上进行；④相互对照：不单设对照组而是几个实验组相互对照。(3)教材P22～23提供的案例中A同学的结果与其他同学不同可能的解释有两种。一是由于土样不同二是由于培养基污染或操作失误。如何设置对照实验来确定原因？提示：方案一：其他同学用与A同学一样的土样进行实验如果结果与A同学一致则证明A同学操作无误；如果结果不同则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养作为空白对照以证明培养基是否受到污染。【拓(1)原理：此法利用特定的细菌计数板或血细胞计数板在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量但不能区分细菌的死活。计数板是一块特制的载玻片上面有一个特定的底面积为1 mm高为0.1 mm的计数室的底面积又被划分成25个(或16个)中格每个中格进一步划分成16个(或25个)小格计数室由400个小格组成。(2)操作：盖上盖玻片将稀释的样品滴在计数板上然后在显微镜下计4～5个中格中的细菌数并求出每个小格所含细菌的平均数再按公式求出每毫升样品中所含的细菌数。(3)计数公式：每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400稀释倍数。(4