#$%基因四环素诱导干扰载体的构建与鉴定.PDFVIP

中国生物工程杂志 猪 基因四环素诱导干扰载体的构建和鉴定 张 力 罗一博 牟彦双 朱 江 李 慧 刘忠华 东北农业大学生命科学院 哈尔滨 摘要基因是在早期胚胎和干细胞等多能性细胞中特异表达的重要基因但有关猪基 因功能的相关研究甚少 四环素诱导干扰载体是一种可通过四环素等药物条件性诱导干扰目的基 因的载体 尤其适用于在发育过程中起着关键作用的基因沉默 常规的四环素干扰系统为二元载 体 与一元载体相比获得针对特定基因干扰的稳定细胞系所需周期更长 首先通过构建 重组干扰载体瞬时转染稳定过表达猪基因的猪胎儿成纤维细胞后通过 筛选出干扰效率可达 以上的干扰片段 之后将筛选得到的干扰片段插入到改造的一元四 环素诱导干扰载体对稳定表达猪基因的猪胎儿成纤维细胞进行了瞬时转染 实 验分别通过光密度检测以及检测了不同浓度的诱导效率和干扰效率 结 果表明所构建的四环素诱导干扰载体 随着四环素浓度的增加诱导基 因的干扰效率增加在处理浓度为 时干扰效率可达 以上为后续得到可诱导的稳定干 扰猪基因的细胞系和进一步研究猪基因功能奠定了基础 关键词四环素诱导干扰猪 中图分类号 是与胚胎发育密切相关的基因 或聚合酶 型启动子 启动子下结果 完全缺失的早期胚胎不能形成上胚层也不能在体外 同样能够达到干扰基因表达的目的并且与相 建立起相应的胚胎干细胞系 利用基因敲除技术对 比作用时期更长 诱导型干扰载体系统可以通过以 此类在胚胎或个体发育阶段起关键作用的基因进行功 外界给药的方式人为控制基因的干扰以达到研究的目 能研究时往往会导致个体还未发育到期便发生了死 的与传统的干扰相比可控性更强 亡现象不利于后续实验的开展 加之利用胚胎干细 实验首先通过对由人泛素启动子 胞进行基因敲除的操作仅限于小鼠这就限制了基因 启动的一元四环素诱导干扰 敲除技术在其他哺乳动物中的应用 干扰技术因 载体加以改造并将针对猪 基因设计和筛选的 其高效快速和成本低廉的优势而应用于基因功能的 高效干扰片段插入到改造后载体中 在实验室 研究 通过化学合成小的 保存的稳定过表达猪基因的猪胎儿成纤维细胞 干扰片段并将其导入细胞内可以达到 中进行了瞬时转染后的诱导干扰实验证明了该诱导 快速使互补序列降解或者阻止靶蛋白翻译的目的 干扰载体在猪胎儿成纤维细胞中的有效性并为进一 而基于载体表达的干扰系统则是将干扰片段以 步探索猪基因功能奠定了基础 类似 结构或发夹状 构建到 聚合酶 型启动子 材料与