利用微卫星标记对蒙古马和纯血马遗传多样性的研究.pdfVIP

266 l生冒麴堑遗盏直弛妾塞进展 利用微卫星标记对蒙古马和纯血马遗传多样性的研究 李金莲石有斐菩 未 (内蒙古农业大学动物科学与医学学院，呼和浩特，010018) 摘要本文通过13个微卫星位点对蒙古马和纯血马两大品种的60匹马进行了遗传检测。用 8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR扩增产物，并用银染法显色。通过软件计算了13个微卫星座 位的等位基因频率、有效等位基因数、多态信息含量和杂合度。结果是13个位点中UCDEQ440变异最 大．TKYl6变异最小；纯血马各项指标的平均值均稍高于蒙古马；总群体的平均遗传分化系数是 0．0429，即品种闻变异占总群体变异的4．29％。这些研究将为今后我国培育优良品种提供思路。 关键词蒙古马；纯血马；微卫星；遗传多样性 (simplesequence 翼序列构成了微卫星位点。微卫星具有数量多，分布广，多态性丰富，呈共显性遗传以及检测快速方便 等优点丽倍受生物技术领域的欢迎。现在微卫星技术在许多家畜上应用很多，但在马上应用较少，特别 是在蒙古马和纯血马的遗传多样性研究方面，国内外还未见报道。场地速度赛马业目前在我国来讲还 处于起步阶段，由于蒙古马是我国优良的地方品种，是我国独特的马遗传资源，具有抗病性强、耐力好和 易合群等特点；纯血马是引进品种，具有体格高大、健壮和速度快等优点。因此，本文旨在通过13个微 卫星位点来分析这两大品种的遗传多样性，为今后我国场地速度赛马业的发展提供理论依据。 1材料与方法 1．1 样本的采集和基因组DNA的提取 采自内蒙古自治区赛马场马术队，均用ACD抗凝，一70℃保存。 基因组DNA的提取具体方法参考《分子克隆实验指南》…。 1．2 PCR引物的选择庞PCR反应条件的确定 百盛公司合成的13对微卫星引物序列见表1。 裹1 13对微卫星引物序列 屋鱼动堑金王遗僮燕盎塑左逵lI267 本实验所采用的ExTaq 检测。 1．3凝胶电泳及微卫星基因型判定 PCR扩增反应结束后，用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR扩增产物，并用硝酸银染色法 显色。以pUCl9 PhotoMW 软件判定各微卫星位点的基因型。 1．4统计指标 informationcon． 计算微卫星位点的等位基因频率(allelefrequency)、多态信息含量(polymorphism numberof 诎她，PIC)、有效等位基因数(effective of (coefficientdifferentiation，Gsr)。 gene 2结果与分析 2．1基因组DNA提取 从冻血中提取的基因组DNA用0．8％琼脂糖凝胶电泳检测，然后在紫外灯下观察，结果见图1。 圈1基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测结果 2．2微卫星DNA的PCR扩增 扩增产物的银染结果。在此只列出其中的一个位点UM002的电泳结果(见图2)。其中，l一7为蒙古马 样品；1’～7’为纯血马样品；M为pUCl9DNA／MspI(HpaII)Marker。 圈2 UM002位点在孽古马和纯血马中的部分扩增结果 2．3微卫星DNA的多态性 2．3．1蒙古马和纯血马两个品种内的遗传变异 根据相应公式计算，以两个品种中的不同个体在每个位点上所检测到的等位基因及根据GENGPOP 软件所得出的等位基因频率(此表略)以及P1C和GDA软件为基础，得到群体内的有效等位基因数、多 态信息含量和杂合度，结果见表2。就各位点来说，UCDEQ440的有效等位基因数、多态信息含量、群体 杂合度这3项数据在两个品种马中都是最高，而TKYl6的3项数据却是最低，说明在13个位点中UC． DEQ440变异最大，TKYl6变异最小；从品种来看，纯血马的各项指标均高于蒙古马，由此说明蒙古马相 对纯血马来说更纯一甚。 268_I生国劲塑遗传直弛班宜进