桔梗RAPD反应体系优化.PDFVIP

维普资讯 广 西 植 物 Guihaia 27(3)：410—413 2007年 5月 桔梗 RAPD反应体系的优化 孙丽娜，严一字 ，吴基 日，吴松权 ，金东淳，王立平 (延边大学 农学院，吉林 龙井 133400) 摘 要 ：以通化桔梗为材料 ，用改进 的cTAB法提取桔梗叶片的总 DNA，通过对不 同镁离子浓度、dNTP浓 度、模板DNA含量、引物浓度、DNA聚合酶量条件下的RAPD扩增反应的效果 ，建立了一个适合桔梗的比较 稳定的RAPD反应体系，用于桔梗遗传多样性分析。结果表明，桔梗 RAPD扩增反应的最佳体系为 ：模板 DNA2Ong，dNTP150z／mol／L，引物0．3~／mol／L，Mg2+浓度2．0mmol／L，TaqDNA聚合酶 1Unit，10×Buff- er2．0 L，PCR反应总体积为 2O L。按此优化RAPD条件进行实验，重现性 良好。 关键词：桔梗 ；体系优化 {CTAB；RAPD 中图分类号：Q943 文献标识码：A 文章编号 ：1000—3142(2007)03—0410—04 OptimizationofRAPD conditions ofPlatycodongrandflorus SUNLi-Na，YANYi-Zi，WUJi—Ri，WUSong-Quan， JIN Dong—Chun，WANG Li—Ping (CollegeofAgriculture，YanbianUniversity，Longing133400，China) Abstract：ThetotalDNAinyoungleavesofPlatycodongrandifton,sfromTonghuawassuccessfullyextractedbyU— singthedevelopedCTAB method．TheoptimumreactionsystemofRAPDfortheP．grandifloFu$wasestablished byRAPD analysisofthedifferentM +，DNA templates，primersandDNA polymerase．Theresultsshow thatthe mostoptimalreactionsystem ofRAPD is：20ngtemplateDNA，dNTPconcentration150 L，0．3ttmol／Lprimer， MgClz2．0mmol，1U Taqpolymerase，10×Taqpolymerasebufferat2．0ttLinthe2O Lreactionvolume．A high reproducibilitywasobtainedwiththeoptimizedexperimentcondition． Keywords~Platycodongrandifloru$；systemoptimation；CTAB；RAPD 桔梗(Platycodongrandiflorus)系桔梗科桔梗 华等，2005)。运用 RAPD技术对桔梗进行遗传多 属植物，它既是一种资源植物，又是一种药、食 、观赏 样性分析时，首先要建立稳定 的反应体系，以保证 兼用的经济植物 (刘德军等，2001)。国内外对桔梗 RAPD结果的可靠性与重复性。为此，本实验就桔梗 的化学成分和组织培养方面研究较多，而在分子水 RAPD反应中的dNTP浓度、镁离子浓度、Taq酶用 平上对桔梗进行分类的研究还未见报道 (舒娈等， 量、模板 DNA浓度、引物浓度等因素对实验结果的影 20