无菌、微生物限度检查及方法验证-课件.pptVIP

2010版《中国药典》微生物限度检查法及应用指导原则 表1 常见干扰物的中和剂或灭活方法 干扰物 可选用的中和剂或灭活方法 戊二醛 亚硫酸氢钠 酚类、乙醇、吸附物 稀释法 醛类 稀释法、甘氨酸、硫代硫酸盐 季铵类化合物（QACs） 卵磷脂、聚山梨酯 对羟基苯甲酸酯 汞类制剂 亚硫酸氢钠、巯基乙酸盐、硫代硫酸盐 双胍类化合物 卵磷脂 碘酒、洗必泰类 聚山梨酯 卤化物 硫代硫酸盐 乙二胺四乙酸（EDTA） 镁或钙离子 磺胺类 对氨基苯甲酸 β-内酰胺类抗生素 β-内酰胺酶 增、修订内容 控制菌培养温度 35~37℃ 30~35℃ 菌落培养和计数时间： 细菌：由48小时 2天 霉菌、酵母菌：由72小时 5天 延长培养时间：由5~7天 7天 离心沉淀法取消，改为500转/分钟离心3分钟，取全部上清混合。只用于细菌检查。（重新验证，中药混悬剂） 增加贴（膏）剂供试品供试液制备 眼用制剂：无菌 凝胶膏剂、贴剂：微生物限度 橡胶膏剂：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 膏药：未要求 增加“培养基的适用性检查” 促生长、指示和抑制特性能力 控制菌检查中增加了白色念珠菌检查 增加了有关滤膜直径的规定： 薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于0.45μm，直径约一般为50mm，若采用其他直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。 增加了薄膜过滤法每张滤膜冲洗量的规定： 每张滤膜每次冲洗量不超过100ml，总冲洗量不得超过1000ml 结果报告 删除控制菌验证中的阴性对照 增加无适宜方法消除抑制菌时的检验 检验方法学验证： 在化学测试中，药品的测定方法需要验证，与此相应，当建立药品的无菌、微生物限度检查法时，也应进行分析方法的验证，以证明所采用的方法适合于该产品的无菌、微生物限度检查。 证明采用药典的某种方法和检验条件，在该供试品的检验量、检验条件下，无抑菌活性或活性已消失，保证检验结果的准确性。 检验方法学验证： 验证时机； 建立检验方法时； 修订检验方法时； 组分和检验条件发生变更时； 定期再验证。 人员 人是无菌药品生产中的主要污染源，在管理比较到位。生产设备自动化程度较好，操作人员素质较高的企业，人员操作所致的污染率超过70%。 具微生物专业知识 经无菌技术培训 对实验结果能进行充分全面的评价。 其它重要影响因素 药品本身的抑菌性； 培养基的促菌生长能力； 培养条件（温度、湿度及需氧或厌氧）； 过滤系统的材质 检验的进展 强调检验的过程控制，提高检出率，保证检验结果的可靠性。 人员的要求 环境、设施要求 培养基适用性 检验数量 方法验证 培养时间 试验用菌 全封闭过滤培养器、隔离系统 检验结果的保证 要求有一个取样计划来涵盖整个批号 有足够的取样量和检验量 选择适用的培养基 采用经验证的无菌检验方法 良好的环境监控 人员保证 无菌检查 无菌检查 定义： 无菌原料药是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂和原料药，包括无菌制剂和无菌原料药。 无菌检查是检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料以及要求无菌的其他物品是否染有活菌的一种方法。 符合无菌检查法的规定仅表明了供试品在该检验条件下未发现细菌和真菌污染。 无菌检查法建立在批产品受微生物污染是均匀的假设上（其实非均匀）。无菌检出低污染的概率极低的。因此，无菌检查存在风险和局限性。 无菌检查的局限性 无法对整批产品进行100%检验 只进行细菌和真菌的检验 培养基 培养条件（如温度和时间）是有限的 我们的工作环境及操作是在相对无菌的状态。 无菌检查：注射剂、植入剂、部分外用药 鼻用制剂：用于手术或创伤的鼻用制剂。 凝胶剂：用于严重创伤的凝胶剂。 乳膏剂：用于烧伤或严重创伤的乳膏剂。 新增的无菌检查中药制剂 散剂：用于烧伤或严重创伤的外用散剂。 鼻用制剂：用于严重创伤的鼻用制剂。 眼用制剂：用于伤口的眼用制剂。 软膏剂：用于烧伤或严重创伤的乳膏剂。 气雾剂、喷雾剂：用于烧伤或严重创伤的气雾剂、喷雾剂。 GMP—取样 取样注意事项，包括为降低取样过程产生的各种风险所采取的预防措施，尤其是无菌或有害物料的取样以及防止取样过程中污染和交叉污染的注意事项； 在生产的每一阶段，应当保护产品和物料免受微生物和其他污染。 附录1无菌药品 质量控制 第八十条 无菌检查的取样计划应当根据风险评估结果制定，样品应当包括微生物污染风险最大的产品。无菌检查样品的取样至少应当符合以下要求： （一）无菌灌装产品的样品必须包括最初、最终灌装的产品以及灌装过程中发生较大偏差后的产品； （二）最终灭菌产品应当从可能的灭菌冷点处取样； （三）同一批产品经多个灭菌设备或同一灭菌设备分次灭菌的，样品应当从各个/次灭菌